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j2

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌转化筛选 已有4人参与

我是将约3600bp质粒和1900bp基因重组,将重组质粒转入大肠杆菌,涂的平板,24h小时内长出蓝色菌。但提出的质粒但酶切是约7000bp,双酶切后也只有3600bp的一条带。难道是2段质粒连了?质粒上不该有lacZ的,怎么菌还是变蓝了。请教下高手,该怎么办~
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修炼ing,当虫仙……
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j2

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-04-04 13:41:03:
不太明白 是蓝白斑筛选吗  蓝斑应该是没有连进去的啊;
你用的是什么载体?

用的蓝白斑筛选原理,但质粒是不表达lacZ的,连接去的基因才表达,所以挑篮色菌落
修炼ing,当虫仙……
3楼2010-04-04 13:51:10
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

不太明白 是蓝白斑筛选吗  蓝斑应该是没有连进去的啊;
你用的是什么载体?
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-04-04 13:41:03
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

楼主用的什么质粒?确定不含LAC?
4楼2010-04-04 16:54:14
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j2

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-04 16:54:14:
楼主用的什么质粒?确定不含LAC?

不含。加进去的基因才含
修炼ing,当虫仙……
5楼2010-04-04 17:08:31
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