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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于DNA Ladder marker
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richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于DNA Ladder marker 已有8人参与

要做DNA Ladder，但买回来的DNA Ladder marker不知道该怎么用，请高手帮忙解答一下。
这些是我买回来的marker的说明书
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1楼 2010-04-02 17:07:34
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shirongjiu

金虫 (正式写手)
richenim(金币+1): 2010-04-03 19:07
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2010-04-03 10:10:56:


我比较奇怪为什么还要加去离子水啊？我做的是凋亡，要检测的基因组DNA断裂为180-200bp，对于你说的 “不能完全按部就班，等你稍微熟悉了就知道该加多少了，根据自己的实验来。你的这个Marker都可以用来标定的 ...

跑电泳DNA的上样量同DNA的分子大小和浓度有关系的，recommedation上说ladder的量同target DNA的量指的是DNA 的Quantity。如果你的target DNA浓度低，则上样体积提高些也无所谓啊。楼主可以试试ladder的上样体积梯度，看看那个volume的电泳图谱清晰就用哪个就行了！！！！！
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6楼2010-04-03 18:51:18
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shirongjiu

金虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流！:tiger06::tiger23: 2010-04-03 09:50
richenim(金币+1): 2010-04-03 09:54
对于5mm胶孔的琼脂糖凝胶而言，吸取1-2ul的ladder、1ul的6*DNA loading dye、4-3ul的去离子水混合后加入胶孔；对于聚丙烯酰胺凝胶来说，方法同表中解释。如果胶孔增加或减少，则ladder的混合液上样量增加幅度按照0.2-0.4ul/1mm胶孔增幅。
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2楼2010-04-03 06:09:57
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

同意楼上的大部分

★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流！:tiger06::tiger23: 2010-04-03 09:51
richenim(金币+1): 2010-04-03 09:55
richenim(金币+1): 2010-04-03 10:11
楼上的基本可行，但是我还是要劝诫楼主，不能完全按部就班，等你稍微熟悉了就知道该加多少了，根据自己的实验来。你的这个Marker都可以用来标定的很细了，一般不用这种，梯度间隔大的好点，要是最后了可以用这种标定一下，能看到你的产物是多大，对测序也有好处。
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3楼2010-04-03 09:15:11
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shirongjiu at 2010-04-03 06:09:57:
对于5mm胶孔的琼脂糖凝胶而言，吸取1-2ul的ladder、1ul的6*DNA loading dye、4-3ul的去离子水混合后加入胶孔；对于聚丙烯酰胺凝胶来说，方法同表中解释。如果胶孔增加或减少，则ladder的混合液上样量增加幅度按照 ...

我再问一下，5mm胶孔是多大的啊？一般的琼脂糖凝胶是多大的胶孔哦？（第一次跑电泳，所以很多不知道啊） 每次这样1-2ul的加样，误差好大哦，可不可以直接将6*DNA loading dye与ladder、去离子水先混合后，再一起上样啊？
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4楼2010-04-03 10:00:53
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