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richenim金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】关于DNA Ladder marker已有8人参与
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要做DNA Ladder，但买回来的DNA Ladder marker不知道该怎么用，请高手帮忙解答一下。 这些是我买回来的marker的说明书    |
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2楼2010-04-03 06:09:57
wangqk198738
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3楼2010-04-03 09:15:11
richenim
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4楼2010-04-03 10:00:53
richenim
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我比较奇怪为什么还要加去离子水啊？我做的是凋亡，要检测的基因组DNA断裂为180-200bp，对于你说的 “不能完全按部就班，等你稍微熟悉了就知道该加多少了，根据自己的实验来。你的这个Marker都可以用来标定的很细了，一般不用这种，梯度间隔大的好点，要是最后了可以用这种标定一下，能看到你的产物是多大，对测序也有好处。” 我不是很理解哦（第一次做，很多还是不知道的，希望能给予指导下哦，谢谢） 还弱弱的问一下，再它的Recommendations 中有提到：Load the same volumes of the DNA sample and the DNA ladder; 但是我们一般上样DNA sample 都是20ul ，但上面提到的DNA ladder才1-2ul 哦？ |
5楼2010-04-03 10:10:56
shirongjiu
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6楼2010-04-03 18:51:18
wangqk198738
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答：大楼主
★ ★ ★ ★ ★
richenim(金币+2): 2010-04-03 19:07
scelab(金币+5):答复的很详细，辛苦了！欢迎多多交流！:tiger06: 2010-04-03 21:46
richenim(金币+2): 2010-04-03 19:07
scelab(金币+5):答复的很详细，辛苦了！欢迎多多交流！:tiger06: 2010-04-03 21:46
1，胶孔的大小不是你说了算的，是你用的梳子，梳子一般有大而稀疏和小而密集两种。再大点的我还真没见过。一般用小孔的就可以，回收的时候用大孔的。2，加Marker也是根据自己的需要加的，你要想亮点就多加点，发表论文的时候多用这样，此外亮度的调节跟在于再UV拍照时，你调节的曝光率。不信你试试看。3，关于你说的混合了再用我还真没碰到过。估计不行，你自己可以操作一下试试看，行就跟大家分享一下。4，去离子水可是不一般啊，它是经过超微滤膜过滤的，和双蒸水有的一拼。你想想离子对酶的影响多大，很明显，你的反应体系根本没有多大，所以要用去离子水的。只不过去离子水偏酸性，但影响不大。5，你所说的上样20微升我不知道是为什么，获取跟你的体系里的产物有关，产物少自然加得多，可我们一般都加十微升就足够了，十五微升是多的不得了了。反应体系最大才五十微升。所以说你的摸索循环数，不是说循环数多了就好，多了对Polymerase不是很好。这个都是要摸索的，真的，建立好自己的反应体系。他们说明书你只能相信50%，你慢慢的就会明白，你想你和他们用的一起一样吗，他们有自己的标准。加Marker一般你说的2微升就足够了，多点也不要紧，毕竟不是很便宜，就那么点。有疑问多提！我来答复，我回答不了的，我再请教别人。  |
7楼2010-04-03 18:54:35
angel2536
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9楼2010-04-03 19:16:20
richenim
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10楼2010-04-03 19:17:24