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richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于DNA Ladder marker 已有8人参与

要做DNA Ladder,但买回来的DNA Ladder marker不知道该怎么用,请高手帮忙解答一下。
这些是我买回来的marker的说明书


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wangqk198738

金虫 (正式写手)

同意楼上的大部分

★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流!:tiger06::tiger23: 2010-04-03 09:51
richenim(金币+1): 2010-04-03 09:55
richenim(金币+1): 2010-04-03 10:11
楼上的基本可行,但是我还是要劝诫楼主,不能完全按部就班,等你稍微熟悉了就知道该加多少了,根据自己的实验来。你的这个Marker都可以用来标定的很细了,一般不用这种,梯度间隔大的好点,要是最后了可以用这种标定一下,能看到你的产物是多大,对测序也有好处。
3楼2010-04-03 09:15:11
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shirongjiu

金虫 (正式写手)

★ ★
scelab(金币+2):谢谢交流!:tiger06::tiger23: 2010-04-03 09:50
richenim(金币+1): 2010-04-03 09:54
对于5mm胶孔的琼脂糖凝胶而言,吸取1-2ul的ladder、1ul的6*DNA loading dye、4-3ul的去离子水混合后加入胶孔;对于聚丙烯酰胺凝胶来说,方法同表中解释。如果胶孔增加或减少,则ladder的混合液上样量增加幅度按照0.2-0.4ul/1mm胶孔增幅。
2楼2010-04-03 06:09:57
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richenim

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by shirongjiu at 2010-04-03 06:09:57:
对于5mm胶孔的琼脂糖凝胶而言,吸取1-2ul的ladder、1ul的6*DNA loading dye、4-3ul的去离子水混合后加入胶孔;对于聚丙烯酰胺凝胶来说,方法同表中解释。如果胶孔增加或减少,则ladder的混合液上样量增加幅度按照 ...

我再问一下,5mm胶孔是多大的啊?一般的琼脂糖凝胶是多大的胶孔哦?(第一次跑电泳,所以很多不知道啊) 每次这样1-2ul的加样,误差好大哦,可不可以直接将6*DNA loading dye与ladder、去离子水先混合后,再一起上样啊?
4楼2010-04-03 10:00:53
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richenim

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wangqk198738 at 2010-04-03 09:15:11:
楼上的基本可行,但是我还是要劝诫楼主,不能完全按部就班,等你稍微熟悉了就知道该加多少了,根据自己的实验来。你的这个Marker都可以用来标定的很细了,一般不用这种,梯度间隔大的好点,要是最后了可以用这种标 ...

我比较奇怪为什么还要加去离子水啊?我做的是凋亡,要检测的基因组DNA断裂为180-200bp,对于你说的 “不能完全按部就班,等你稍微熟悉了就知道该加多少了,根据自己的实验来。你的这个Marker都可以用来标定的很细了,一般不用这种,梯度间隔大的好点,要是最后了可以用这种标定一下,能看到你的产物是多大,对测序也有好处。” 我不是很理解哦(第一次做,很多还是不知道的,希望能给予指导下哦,谢谢)
还弱弱的问一下,再它的Recommendations 中有提到:Load the same volumes of the DNA sample and the DNA ladder; 但是我们一般上样DNA sample 都是20ul ,但上面提到的DNA ladder才1-2ul 哦?
5楼2010-04-03 10:10:56
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