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[交流]
【求助/交流】引物质谱结果好，怎么还有30-40%引物发生碱基缺失
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最近在用一种新方法做pcr拼接基因，能够串联成为5个以上拷贝的基因，但是有一个问题相当恼火，那就是引物 第一次做的引物是在捷瑞，单菌落测序发现有30-40%的下游引物发生了某个“A”的缺失（上游引物无任何突变发生），导致整条DNA 链报废，然后在生工重合上下游引物（45bp），用ultrapage纯化，质谱图只有一条峰，但是做出来的结果还是像上次一样，单菌落测序发现有30-40%的下游引物发生了这同一个“A”的缺失，我靠，请帮忙分析是什么原因？ 肯定不是PCR的问题，也不是割胶经紫外线照射突变的，难道是质粒复制过程中发生的？  |
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