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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量PCR的引物怎么设计
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liuyuxiu07

[交流] 【求助/交流】荧光定量PCR的引物怎么设计 已有1人参与

各位大牛，荧光定量PCR的引物怎么设计？
我的序列已得到了500bp，无内含子，但是我上次设计的引物定量的扩增图有几个基本都没有起峰。
很茫然，我用primer 5设计的。请问有什么要注意的吗？
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1楼 2010-03-31 18:20:28
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434744419

金虫 (小有名气)
★
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即使引物不好也会起很多杂峰！ 是不是引物设计问题啊  重新设计引物吧
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2楼2010-04-01 16:48:16
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siben

铜虫 (小有名气)
★
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设计荧光定量的引物其实和普通的引物设计是一样的，只是注意要片段控制在100-250之内，并且特异性要强，还有就是最好跨内含子设计引物，这样一般不会有问题的。你的没起峰，应该是引物没设计好！
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最近很困惑！
3楼2010-04-01 21:06:26
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1110rainjob

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我在takara订购过realtimePCR引物，他们给免费设计。你可以试试。
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4楼2010-04-01 22:54:32
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jasco

木虫 (正式写手)
先用普通pcr验证引物
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5楼2010-04-01 22:57:21
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shuwenying

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果你们用的是ABI公司的仪器，他们有购机赠送的软件，Primer Express，用来设计定量PCR的引物是蛮好的，这个软件只要买ABI定量PCR仪都会送的，单独买是很贵的，所以要好好利用资源，不要浪费呢！
如果没有的话，可以用primer5或者6。个人觉得，跟primer同一个公司开发的AlleleID软件也是挺好用的，AlleleID有不同的设计程序，可以让你选择是设计Taqman探针和引物、SYBY Green的引物，还是分子信标等方法用的引物，里面的默认参数设置都是针对不同方法的要求，例如用SYBY Green法的引物，设计出来再用其他的软件分析，发现确实不容易产生引物二聚体，实际做实验的效果也是挺理想的，具体这些软解的下载破解可以在论坛里面搜一下，有很多虫友提供了资源
也可以短信我~~~祝实验顺利！
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6楼2010-04-10 18:19:36
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