24小时热门版块排行榜    

查看: 1170  |  回复: 5
当前主题已经存档。

liuyuxiu07

[交流] 【求助/交流】荧光定量PCR的引物怎么设计 已有1人参与

各位大牛,荧光定量PCR的引物怎么设计?
我的序列已得到了500bp,无内含子,但是我上次设计的引物定量的扩增图有几个基本都没有起峰。
很茫然,我用primer 5设计的。请问有什么要注意的吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

434744419

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
即使引物不好也会起很多杂峰! 是不是引物设计问题啊  重新设计引物吧
2楼2010-04-01 16:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

siben

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
设计荧光定量的引物其实和普通的引物设计是一样的,只是注意要片段控制在100-250之内,并且特异性要强,还有就是最好跨内含子设计引物,这样一般不会有问题的。你的没起峰,应该是引物没设计好!
最近很困惑!
3楼2010-04-01 21:06:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1110rainjob

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我在takara订购过realtimePCR引物,他们给免费设计。你可以试试。
4楼2010-04-01 22:54:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

先用普通pcr验证引物
5楼2010-04-01 22:57:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuwenying

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果你们用的是ABI公司的仪器,他们有购机赠送的软件,Primer Express,用来设计定量PCR的引物是蛮好的,这个软件只要买ABI定量PCR仪都会送的,单独买是很贵的,所以要好好利用资源,不要浪费呢!
如果没有的话,可以用primer5或者6。个人觉得,跟primer同一个公司开发的AlleleID软件也是挺好用的,AlleleID有不同的设计程序,可以让你选择是设计Taqman探针和引物、SYBY Green的引物,还是分子信标等方法用的引物,里面的默认参数设置都是针对不同方法的要求,例如用SYBY Green法的引物,设计出来再用其他的软件分析,发现确实不容易产生引物二聚体,实际做实验的效果也是挺理想的,具体这些软解的下载破解可以在论坛里面搜一下,有很多虫友提供了资源
也可以短信我~~~祝实验顺利!
6楼2010-04-10 18:19:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuyuxiu07 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +9 kulium 2026-08-21 10/500 2026-08-21 19:19 by 诗眼倦天涯
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
请填处理意见