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wdongdong

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】HIS-TAG

本人现在做蛋白表达,我的目的基因连在PET28上,发现上面N和C端都有HIS标签,我设计引物时,把我基因的终止密码子去掉了,也就是说现在我的目的基因二边都含有HIS标签,并且读码框正确,
   请问高手,二边都有HIS标签会影响基因的表达纯化吗?
貌似大家做的时候都是用一端HIS标签来表达纯化.
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

wdongdong(金币+1): 2010-04-12 14:37
如果只是纯化肯定不影响了
2楼2010-03-31 13:46:45
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wdongdong

金虫 (小有名气)

那问下,会影响什么呀?
3楼2010-03-31 13:54:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by wdongdong at 2010-03-31 13:54:10:
那问下,会影响什么呀?

影响蛋白质空间结构/活性之类的。
4楼2010-03-31 15:02:00
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wdongdong

金虫 (小有名气)

就是呀,影响空间结构不就影响纯化了,不知道有没有人做过
5楼2010-03-31 15:24:47
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

wdongdong(金币+1): 2010-04-01 14:37
纯化时蛋白往往是线性变性的,哪来的影响结构,
不过序列多了不好,影响活性
6楼2010-03-31 15:31:15
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wdongdong

金虫 (小有名气)

HIS标签虽然很小,二边都有会不会影响我蛋白的活性呀,后续试验还要做功能呀
7楼2010-03-31 15:38:20
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

用的是PET28 a?b?c?,貌似PET28a和PET28c下游的His-Taq是移码的,不能保证两个his-taq都有效的。详细请看图谱。
Thank-you,so-blue.
8楼2010-03-31 19:45:02
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

pET28只有b系列才会在两端都有His标签!
9楼2010-03-31 20:12:18
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