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yoyo1919铜虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】lovo细胞成团怎么处理？ 已有5人参与
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| 由于接手这个lovo细胞的时候，细胞密度已经比较大了，而且成团，之后，消化传代了很多次还是成团，细胞始终不能展开，纠成一块，看不清边缘。最开始我不懂，看上去以为一些成团的细胞是一个细胞由于传代了很多次而发生了形态的变异，后来在实验室一位同事的指导下，才明白这样是成团的情况。之后，我尝试了用PBS尽量把那些成团的，重叠生长的细胞吹下来，但是，效果并不是很明显，吹下来的细胞还是成团，就是那种小团，十分顽固。没吹下来的还是粘成一片。之后，我尝试将其中一瓶用0.25%的胰酶消化了一个晚上，大约14-15个小时左右。今天来观察时，发现绝大部分的团块打开了，有的细胞还是粘在一起，但是能够看得清楚细胞的边缘，而不是抱团长得像个疙瘩。细胞在胰酶里面仍然有部分贴壁了，应该可以存活，但是还有很多漂浮起来了，经过1000rpm离心5分钟后，弃去胰酶，加入了培养基在养着，还不知道能存活多少？我现在不清楚这样处理细胞对它的伤害有多大，而且经过了这样消化还顽强活下来的lovo细胞会不会有什么变异啊？ |
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2楼2010-03-29 08:17:26
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3楼2010-03-29 08:27:27
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三楼有点转移话题了·· 我最近养的Hela细胞也出现了这样的问题，我传代的细胞密度也不大，第二天时候已经长到进70%了（50ml培养瓶），而且会出现细胞抱团的现象，团并不大，我对这样的细胞又一次进行了0.25%胰酶消化重分散，可是还是有顽固的细胞团。是我吹打的力度不够么？吹打过猛会产生大量的气泡，这样会影响细胞的生长么？ 我看有资料说胰酶消化过长会使细胞死亡，至于说细胞突变还没有看到过。我每次都是37度消化约2分钟，这个消化时间如何掌握？还请高手赐教！ |
4楼2010-04-07 23:13:56
wwy1984627
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我以前培养过胰腺癌细胞RIN-M5F，也遇到过这种细胞成团，胰酶消化不开的问题。后来咨询了专家，说用EDTA消化液就很容易使细胞分散开来。试用了后效果不错。方法如下：EDTA是一种化学螯合剂，对细胞有一定的离散作用，而且毒性小，价格低廉，使用方便； 常用工作液浓度为0.02%； 注意：使用EDTA 处理细胞后，要用平衡盐液冲洗干净，因残留的EDTA 会影响细胞生长 EDTA 溶液配制：用平衡盐溶液配制，高压蒸汽灭菌，分装成小瓶，4℃冰箱保存。 |
5楼2010-04-08 15:47:23
yoyo1919
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8楼2010-04-08 20:41:38