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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物测序结果疑问？？
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 gydgs033 的 2 个金币

gydgs033

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物测序结果疑问？？

我的PCR目的产物131bp，在英俊测序（使用上下游引物同时测序），但是经常出英俊公司回复测序结果是双峰或前双峰，请问双峰和前双峰所代表的意义及产生的原因？由于我测序的目的是看是否有点突变，使用测序结果与目的产物序列比对发现，使用上游引物测序结果与目的产物序列在47bp处出现突变，目的产物为A，测序为T，但用下游引物测序在该位置无突变，请问原因？另问基因点突变是指正义链某碱基突变，而反义链也伴随其突变，还是只有正译链突变，反义链不变？？？请教高手？？？
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1楼 2010-03-28 10:07:33
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段家一凡

木虫 (正式写手)
gydgs033(金币+2): 2010-03-29 13:43
双峰说明PCR产物中有两个不同的片段，前双峰可能是两种不同的PCR产物，前段不一样，后面一样。基因点突变是两条链都突变了。你可以把你的PCR产物连入载体，再测序，可能会清楚一点。
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2楼2010-03-28 16:24:57
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
gydgs033(金币+1): 2010-03-29 13:43
克隆后再测测试试
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3楼2010-03-28 16:56:25
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gydgs033

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 段家一凡 at 2010-03-28 16:24:57:
双峰说明PCR产物中有两个不同的片段，前双峰可能是两种不同的PCR产物，前段不一样，后面一样。基因点突变是两条链都突变了。你可以把你的PCR产物连入载体，再测序，可能会清楚一点。

再请教一下：我的测序结果虽然说是双峰，但是他们只给出一个序列，并且我和目的序列比对之后却是100%一样，这可以说我P成功了么，还是一定要以单双峰为准啊？
另外，我提供的虽是PCR产物，但是公司是负责给纯化的，引物也都是PAGE纯化的，这种情况还需要克隆之后再测序么？
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4楼2010-03-29 13:48:00
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by gydgs033 at 2010-03-29 13:48:00:

再请教一下：我的测序结果虽然说是双峰，但是他们只给出一个序列，并且我和目的序列比对之后却是100%一样，这可以说我P成功了么，还是一定要以单双峰为准啊？
另外，我提供的虽是PCR产物，但是公司是负责给纯化 ...

我觉得你的结果可信了，不用克隆了，不过你那一个突变不知道是否是真的突变，再测一个样吧
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5楼2010-03-29 14:17:37
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tangw_007
6楼2010-03-29 16:29:48
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虫虫博士

新虫 (小有名气)
既然反向引物测的是不突变的，说明就是没有突变，死心吧，此位置没有突变。
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7楼2010-03-29 17:36:31
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