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q307078056

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】这样的电泳结果,是基于什么原因导致呢?

短片段电泳,maker为500bp,空白样品无异常,只是……

阳性菌按浓度梯度从右到左有3次幂到7次幂IU值,目的条带清晰,
只是为何随着阳性菌浓度增强,目的条带后方会有一条杂带呢?

不得其解,能否有人能够帮我解释一下呢..   谢谢

上图!

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人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
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yang0071

木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR结果?
模板本身带有的杂质
2楼2010-03-25 18:13:59
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物的非特异性扩增,随着模版浓度增大,非特异性扩增自然就明显了,升高退火温度,估计这条带就没有了
3楼2010-03-25 18:28:24
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tanfeng198

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是电泳液太久没换了?
4楼2010-03-25 18:31:33
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q307078056

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2010-03-25 18:06:39:
短片段电泳,maker为500bp,空白样品无异常,只是……

阳性菌按浓度梯度从右到左有3次幂到7次幂IU值,目的条带清晰,
只是为何随着阳性菌浓度增强,目的条带后方会有一条杂带呢?

不得其解,能否有人能够帮 ...

貌似这种情况存在的可能性比较大,谢谢
人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
5楼2010-03-25 20:37:21
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR中的模板该适量
在PCR反应过程中影响特异性的不仅仅是引物特异性、退火温度,也包括引物的浓度、模板的量、DNA聚合酶的量以及镁离子的浓度。
6楼2010-03-26 01:05:21
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wenzhenice

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
seems like you have to change your buffer and set a higer annealing Tem
7楼2010-03-26 04:38:23
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axiaoru


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
请问大家一般反转录液都稀释多少倍再做PCR呢?PCR25微升体系加多少模板?
8楼2010-03-26 10:45:04
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q307078056

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by axiaoru at 2010-03-26 10:45:04:
请问大家一般反转录液都稀释多少倍再做PCR呢?PCR25微升体系加多少模板?

反转录液?..  

模板的话,基本是1 - 2ul吧,看你的模板浓度囖..  呵呵呵
人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
9楼2010-03-27 17:12:46
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q307078056

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2010-03-25 18:13:59:
PCR结果?
模板本身带有的杂质

我初初开始也认为是模板自身的杂质,使用两套模板进行实验也有这样的结果..  

难道是引物设计上有问题?那NTC条带应该也有那条带才是呢..
人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
10楼2010-03-27 17:14:28
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