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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】这样的电泳结果，是基于什么原因导致呢？
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q307078056

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】这样的电泳结果，是基于什么原因导致呢？

短片段电泳，maker为500bp，空白样品无异常，只是……

阳性菌按浓度梯度从右到左有3次幂到7次幂IU值，目的条带清晰，
只是为何随着阳性菌浓度增强，目的条带后方会有一条杂带呢？

不得其解，能否有人能够帮我解释一下呢..   谢谢

上图！
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
1楼 2010-03-25 18:06:39
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR结果？
模板本身带有的杂质
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2楼2010-03-25 18:13:59
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物的非特异性扩增，随着模版浓度增大，非特异性扩增自然就明显了，升高退火温度，估计这条带就没有了
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3楼2010-03-25 18:28:24
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tanfeng198

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是电泳液太久没换了？
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4楼2010-03-25 18:31:33
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q307078056

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by q307078056 at 2010-03-25 18:06:39:
短片段电泳，maker为500bp，空白样品无异常，只是……

阳性菌按浓度梯度从右到左有3次幂到7次幂IU值，目的条带清晰，
只是为何随着阳性菌浓度增强，目的条带后方会有一条杂带呢？

不得其解，能否有人能够帮 ...

貌似这种情况存在的可能性比较大，谢谢
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
5楼2010-03-25 20:37:21
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR中的模板该适量
在PCR反应过程中影响特异性的不仅仅是引物特异性、退火温度，也包括引物的浓度、模板的量、DNA聚合酶的量以及镁离子的浓度。
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6楼2010-03-26 01:05:21
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wenzhenice

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
seems like you have to change your buffer and set a higer annealing Tem
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7楼2010-03-26 04:38:23
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axiaoru

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问大家一般反转录液都稀释多少倍再做PCR呢？PCR25微升体系加多少模板？
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8楼2010-03-26 10:45:04
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q307078056

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by axiaoru at 2010-03-26 10:45:04:
请问大家一般反转录液都稀释多少倍再做PCR呢？PCR25微升体系加多少模板？

反转录液？..  

模板的话，基本是1 - 2ul吧，看你的模板浓度囖..  呵呵呵
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
9楼2010-03-27 17:12:46
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q307078056

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2010-03-25 18:13:59:
PCR结果？
模板本身带有的杂质

我初初开始也认为是模板自身的杂质，使用两套模板进行实验也有这样的结果..  

难道是引物设计上有问题？那NTC条带应该也有那条带才是呢..
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人生不是一种享受，而是一桩沉重异常的工作
10楼2010-03-27 17:14:28
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