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1118

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】纯化后透析除咪唑蛋白沉淀 已有2人参与

现在有一蛋白,纯化后溶解在20 mM K2HPO4,500 mM咪唑中(蛋白浓度2 mg/ml左右),蛋白在4度过夜透析到PBS,发现蛋白大部分沉淀,是什么原因呢?
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1118

木虫 (小有名气)

大家积极发言哈
2楼2010-03-24 12:35:17
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1118

木虫 (小有名气)

大家积极发言哈
3楼2010-03-25 12:35:35
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黑罕

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你可以测一下PH值
因为500mM 咪唑是偏碱的
可以考虑PH
是不是会因为PH值发生了改变
4楼2010-03-25 13:37:04
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1118

木虫 (小有名气)

前后PH值是一样的哈
5楼2010-03-25 14:20:47
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的蛋白要是不换Buffer在4度下的稳定性如何?放过夜试试。
感觉透析已经是非常温和的手法了,如果用超滤管换Buffer那将是一种很剧烈的方法,短时间浓缩到高浓度,瞬间稀释,反复折腾,这种方法倒是很有可能是蛋白沉淀。
还有可能就是相对盐浓度降低,蛋白溶解性减小。
或者下次直接使用含有咪唑的PBS洗脱目的蛋白,然后透析除掉咪唑。
试试看吧,探索一些原因。
6楼2010-03-26 01:15:43
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小白3521

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 1118 at 2010-03-24 11:11:44:
现在有一蛋白,纯化后溶解在20 mM K2HPO4,500 mM咪唑中(蛋白浓度2 mg/ml左右),蛋白在4度过夜透析到PBS,发现蛋白大部分沉淀,是什么原因呢?

问题解决了吗?我那刚透析 也出现了沉淀
7楼2010-04-15 20:01:17
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1118

木虫 (小有名气)

还没有解决哈,烦死了
8楼2010-04-16 07:47:35
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