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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】纯化后透析除咪唑蛋白沉淀
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1118

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】纯化后透析除咪唑蛋白沉淀 已有2人参与

现在有一蛋白，纯化后溶解在20 mM K2HPO4,500 mM咪唑中（蛋白浓度2 mg/ml左右)，蛋白在4度过夜透析到PBS，发现蛋白大部分沉淀，是什么原因呢？
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1楼 2010-03-24 11:11:44
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黑罕

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你可以测一下PH值
因为500mM 咪唑是偏碱的
可以考虑PH
是不是会因为PH值发生了改变
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4楼2010-03-25 13:37:04
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1118

木虫 (小有名气)
前后PH值是一样的哈
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5楼2010-03-25 14:20:47
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的蛋白要是不换Buffer在4度下的稳定性如何？放过夜试试。
感觉透析已经是非常温和的手法了，如果用超滤管换Buffer那将是一种很剧烈的方法，短时间浓缩到高浓度，瞬间稀释，反复折腾，这种方法倒是很有可能是蛋白沉淀。
还有可能就是相对盐浓度降低，蛋白溶解性减小。
或者下次直接使用含有咪唑的PBS洗脱目的蛋白，然后透析除掉咪唑。
试试看吧，探索一些原因。
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6楼2010-03-26 01:15:43
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小白3521

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 1118 at 2010-03-24 11:11:44:
现在有一蛋白，纯化后溶解在20 mM K2HPO4,500 mM咪唑中（蛋白浓度2 mg/ml左右)，蛋白在4度过夜透析到PBS，发现蛋白大部分沉淀，是什么原因呢？

问题解决了吗？我那刚透析 也出现了沉淀
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7楼2010-04-15 20:01:17
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