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以诺9070

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物电泳图变形的问题

对PCR产物进行电泳分析,发现目的条带变形明显,而marker不受影响。电泳设置的条件100v,100mA,新更换的电泳液,开始时电压为100V,电泳1小时后,电压为90V。
是电泳液的问题吗?还是含有蛋白、点样没弄好的缘故?
如果是电泳液的问题,是否说明我的药品不合格呢?
多谢了



[ Last edited by 以诺9070 on 2010-3-23 at 18:26 ]
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

1:是不是pcr没有完全啊?感觉条带既不规则~
2:你是用100V 1小时吗? 你们实验室都是这样的条件吗?按理说电压大一半时间应该设短一些啊?
3:你pcr产物多大?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-03-23 18:29:19
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以诺9070

金虫 (小有名气)

PCR产物就应该和marker最上面的条带一样大。
是100V跑的电泳,跑了半个小时曾拿出来看了一下,后来又放回去接着跑的。

第一次跑,不知道应该用多大电压、多长时间。有些同学就用100V
3楼2010-03-23 18:39:50
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hong303030

金虫 (小有名气)

以诺9070(金币+2):有道理,谢谢 2010-03-23 19:40
是胶的问题吧,或者是PCR体系配置的时候药品没有完全融化,然后就配体系跑PCR了,建议用80V,跑30min,试试
4楼2010-03-23 19:08:48
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可波

银虫 (正式写手)

中正居士

以诺9070(金币+1):谢谢 2010-03-23 20:18
胶的问题,建议5v/cm电压
Entertogrowinwisdom,departtoservebetterthycountryandthykind.
5楼2010-03-23 19:35:48
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yinsongna

金虫 (正式写手)

胶的原因  应该是你拔梳子的时候没注意到点样孔还有残余的胶
6楼2010-03-23 21:23:00
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先告诉楼主,你说Marker没有问题就错了,你的Marker明显可以看出也有波浪,和你的样品是一样的问题,但是因为没有样品浓度大,所以看起来不明显,Marker跑成这个样子,很明显是胶的问题,你新配的电泳液,可能你制胶的缓冲液和电泳液浓度不一致造成了这样的结果。我想你的样品很好,不存在问题,你电泳的电压和时间应该也没有问题,你告诉100V30min,但是电泳槽多长没有说,但是即使是最小的那种,这个电压也不高
7楼2010-03-23 22:17:18
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
换新配的buffer配胶和跑电泳
记得要溶解充分哦~
8楼2010-03-23 22:32:17
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spiderboy

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这明显就是胶的问题,胶的浓度不均匀。重新换下缓冲液,重新配胶。
还有要保证胶口平整,不平也会跑歪的。
这种情况我遇多了
9楼2010-03-23 22:58:52
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
直接重新配胶,一定是胶的问题与电压没关系,我也出现过这种情况
10楼2010-03-24 09:13:02
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