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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物电泳图变形的问题
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以诺9070

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物电泳图变形的问题

对PCR产物进行电泳分析，发现目的条带变形明显，而marker不受影响。电泳设置的条件100v，100mA，新更换的电泳液，开始时电压为100V，电泳1小时后，电压为90V。
是电泳液的问题吗？还是含有蛋白、点样没弄好的缘故？
如果是电泳液的问题，是否说明我的药品不合格呢？
多谢了



[ Last edited by 以诺9070 on 2010-3-23 at 18:26 ]
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1楼 2010-03-23 18:21:56
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
1：是不是pcr没有完全啊？感觉条带既不规则~
2:你是用100V 1小时吗？ 你们实验室都是这样的条件吗？按理说电压大一半时间应该设短一些啊？
3：你pcr产物多大？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-03-23 18:29:19
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以诺9070

金虫 (小有名气)
PCR产物就应该和marker最上面的条带一样大。
是100V跑的电泳，跑了半个小时曾拿出来看了一下，后来又放回去接着跑的。

第一次跑，不知道应该用多大电压、多长时间。有些同学就用100V
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3楼2010-03-23 18:39:50
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hong303030

金虫 (小有名气)
以诺9070(金币+2):有道理，谢谢 2010-03-23 19:40
是胶的问题吧，或者是PCR体系配置的时候药品没有完全融化，然后就配体系跑PCR了，建议用80V，跑30min,试试
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4楼2010-03-23 19:08:48
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可波

银虫 (正式写手)

中正居士
以诺9070(金币+1):谢谢 2010-03-23 20:18
胶的问题，建议5v/cm电压
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Entertogrowinwisdom,departtoservebetterthycountryandthykind.
5楼2010-03-23 19:35:48
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yinsongna

金虫 (正式写手)
胶的原因  应该是你拔梳子的时候没注意到点样孔还有残余的胶
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6楼2010-03-23 21:23:00
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先告诉楼主，你说Marker没有问题就错了，你的Marker明显可以看出也有波浪，和你的样品是一样的问题，但是因为没有样品浓度大，所以看起来不明显，Marker跑成这个样子，很明显是胶的问题，你新配的电泳液，可能你制胶的缓冲液和电泳液浓度不一致造成了这样的结果。我想你的样品很好，不存在问题，你电泳的电压和时间应该也没有问题，你告诉100V30min，但是电泳槽多长没有说，但是即使是最小的那种，这个电压也不高
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7楼2010-03-23 22:17:18
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换新配的buffer配胶和跑电泳
记得要溶解充分哦~
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8楼2010-03-23 22:32:17
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spiderboy

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这明显就是胶的问题，胶的浓度不均匀。重新换下缓冲液，重新配胶。
还有要保证胶口平整，不平也会跑歪的。
这种情况我遇多了
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9楼2010-03-23 22:58:52
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
直接重新配胶，一定是胶的问题与电压没关系，我也出现过这种情况
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10楼2010-03-24 09:13:02
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