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zeroron

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】请教大家一个酶催化的问题

我做一个酶催化的酯类水解反应。试了NOVOZYM 435等很多商品脂肪酶,蛋白酶,但是都没有催化结果。用的酶量应该还算大大过量(底物浓度非常低,1mM)
结果我用自己培养的细菌,用细菌破碎液来催化水解。结果在破碎液量非常大的时候才有很明显的催化效果。(我5ml体系,测出破碎液加得越多底物转化率就越大,最后我干脆全部用细菌破碎液加上底物和一点有机溶剂来反应)
我感觉我使用了太多的酶(细菌破碎液),这样感觉很奇怪。特别是相对我这个很低的底物浓度,一般的反应不需要很多酶就可以了,不知道大家怎么看这个问题呢?有牛人给我点指导吗?谢谢大家啦!
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zeroron

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yubeihong at 2010-03-18 10:23:41:
反应体系是均相?

是水相和一定量的DMSO
7楼2010-03-19 10:10:34
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★
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lwb1987521(金币+1):感谢交流 2010-03-17 16:41
具体底物和细菌都不说,别人怎么帮你分析!
酶活也没测
2楼2010-03-17 09:09:40
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zeroron

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yubeihong at 2010-03-17 09:09:40:
具体底物和细菌都不说,别人怎么帮你分析!
酶活也没测

sorry,我用的是枯草芽孢杆菌,酶活之前用pnpA测过,还比较高(相对于NOVO435),我实验时加的酶活肯定大大高于之前测酶活时的用量了。
底物是一个头孢类化合物的酯类
3楼2010-03-17 10:13:24
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chenyyy

无虫 (正式写手)

★ ★
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lwb1987521(金币+1):感谢交流 2010-03-17 16:42
酶的专一性不对。。。再多筛几种酶吧
4楼2010-03-17 11:57:33
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