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小猫三两只

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酵母菌液PCR

做了好几次,都没有成功,方法就是配好体系后,加上一微升的酵母菌液直接在PCR仪上扩,怎么就是没有产物
而用大肠杆菌的菌液扩增效果很好,想问一下用酵母菌液做模板时是不是还需要一些预处理?

[ Last edited by 小猫三两只 on 2010-3-14 at 11:47 ]
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

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1949stone(金币+1): 2010-03-14 14:52
试着加点表面活性剂,比如吐温80行不行呢
2楼2010-03-14 12:09:15
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-14 14:52
酵母“皮厚”,煮沸20min做模板都不行,要提基因组做模板!!!
砖石王老三!!!
3楼2010-03-14 12:53:58
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xhy0016

金虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-14 14:52
那就先用超声波破碎一下再做嘛
4楼2010-03-14 13:52:58
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sl19840203

木虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-14 14:52
酵母细胞比较大,细胞不宜破碎,我们也试过菌液PCR,效果很不理想,但是基因组提出后再PCR,效果就不一样了。
5楼2010-03-14 14:07:38
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09021122

木虫 (正式写手)


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最好先把菌液按照1:9的比例稀释下
然后震荡处理20到30分钟
雄关漫道真如铁,而今迈步从头越
6楼2010-03-16 20:17:40
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以先用蜗牛酶处理一下,然后在煮一下,后拿来做模板
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-03-16 20:58:17
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mofatuzi

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酵母要提基因组再PCR,至少也要破壁后再P,酵母壁很厚的
8楼2010-03-17 11:09:53
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cascc

铜虫 (小有名气)

告诉你一个简单的方法:
• Use a pipetman tip to transfer yeast cells (about this much:  • ) to 30 microliters of 0.2% SDS.  JuanJo had success using a pellet of 3 x 106 cells from a liquid culture.
• Vortex ~15 seconds
• Heat in hot block for 4 min at 90 deg.
• Spin in microfuge 1 min. Remove supernatant to a new tube.

之后稀释10倍,按照常规PCR加入上述模板去做。
9楼2010-03-17 20:26:46
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