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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母菌液PCR
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酵母菌液PCR

做了好几次，都没有成功，方法就是配好体系后，加上一微升的酵母菌液直接在PCR仪上扩，怎么就是没有产物
而用大肠杆菌的菌液扩增效果很好，想问一下用酵母菌液做模板时是不是还需要一些预处理？

[ Last edited by 小猫三两只 on 2010-3-14 at 11:47 ]
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1楼 2010-03-14 11:46:15
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-14 14:52
试着加点表面活性剂，比如吐温80行不行呢
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2楼2010-03-14 12:09:15
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-14 14:52
酵母“皮厚”，煮沸20min做模板都不行，要提基因组做模板！！！
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砖石王老三！！！
3楼2010-03-14 12:53:58
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xhy0016

金虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1): 2010-03-14 14:52
那就先用超声波破碎一下再做嘛
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4楼2010-03-14 13:52:58
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sl19840203

木虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1): 2010-03-14 14:52
酵母细胞比较大，细胞不宜破碎，我们也试过菌液PCR，效果很不理想，但是基因组提出后再PCR，效果就不一样了。
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5楼2010-03-14 14:07:38
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09021122

木虫 (正式写手)
★
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最好先把菌液按照1：9的比例稀释下
然后震荡处理20到30分钟
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雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
6楼2010-03-16 20:17:40
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
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可以先用蜗牛酶处理一下，然后在煮一下，后拿来做模板
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-03-16 20:58:17
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mofatuzi

新虫 (小有名气)
★
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酵母要提基因组再PCR,至少也要破壁后再P,酵母壁很厚的
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8楼2010-03-17 11:09:53
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cascc

铜虫 (小有名气)
告诉你一个简单的方法：
• Use a pipetman tip to transfer yeast cells (about this much:  • ) to 30 microliters of 0.2% SDS.  JuanJo had success using a pellet of 3 x 106 cells from a liquid culture.
• Vortex ~15 seconds
• Heat in hot block for 4 min at 90 deg.
• Spin in microfuge 1 min. Remove supernatant to a new tube.

之后稀释10倍，按照常规PCR加入上述模板去做。
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9楼2010-03-17 20:26:46
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