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bernadat

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】想知道指纹图谱跟高效液相色谱的最根本区别 已有7人参与

要做指纹图谱了,看来看去没发现高效液相色谱跟指纹图谱有什么根本区别,用的检测器可以是一样,只不过指纹图谱跑的时间都很长,都采用了梯度洗脱,尽量要保证所有成分都出来,难道这就是两者的区别???很想知道答案,望过客不吝赐教
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wakan

木虫 (正式写手)

bernadat(金币+3): 2010-03-17 08:51
诚如2楼所说,指纹图谱有很多种,如果楼主做的是HPLC指纹图谱,那么HPLC指纹图谱用的谱图就是HPLC的谱图,但是指纹图谱跟常规用HPLC检测几个目标物是有区别的。
  常规用HPLC做目标物检测,只要目标物能够获得足够的分离度,峰形漂亮,峰面积足够就基本搞定了。但是如果做指纹图谱,不仅要用梯度洗脱、延长洗脱时间等手段保证里面的物质尽量洗脱出来,而且要保证出来的各个峰的峰面积差异不能过大,否则在后续做图谱相似度匹配时,大峰占据的比重过大,对整个样品间相似度评价的贡献过大,这样的指纹图谱就不完美了,不具用该指纹图谱来定性该药物的专属性,因此如果用的是紫外检测器或者是DAD检测器时,除了优化洗脱外,对检测器条件的优化也是非常重要的,具体优化过程可能比目标物检测要复杂得多。
  从指纹图谱的概念出发,你的图谱要保证稳定性、模糊性和专属性。
  稳定性即同一批药材出来的指纹图谱要能完美重复,相似度匹配率要高。
  模糊性即不能只着眼优化单个峰,不能用这少数两三个峰来代表该药材,而是用整张图谱来代表该药材。在保证整个图谱的整体分离度基础上可以牺牲部分个别峰的分离度。从信息论的观点看,如果整张图谱所有峰的分离度总和最大,可以代表着该图谱含有最大化的化学信息,这就足够。
  专属性就是这张图谱要有跟其他药物的图谱区别俄地方,不能两个药物做出的图谱的相似度很高,那么这个指纹图谱就代表不了任何药物了。该药物的指纹图谱要具有该药物区别于其他药物的特征,不一定是分离出越多的物质就越好,如果专属性足够,牺牲个别峰的分离度,使分离检测条件相对简化,分析时间相对减少也是可行的,而且简化的条件还能提高图谱的重现性。
4楼2010-03-13 18:27:33
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yunmeng6001

金虫 (著名写手)

bernadat(金币+1): 2010-03-17 08:51
指纹图谱的方法很多,包括薄层扫描(TLCS)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)和高效毛细管电泳法(HPCE)等色谱法以及紫外光谱法(UV)、红外光谱法(IR)、质谱法(MS)、核磁共振法(NMR)和X—射线衍射法等光谱法,其中色谱方法为主流方法,尤其是HPLC。这样说就是没什么差别啊。
心中若无烦恼事便是人生好时节
2楼2010-03-13 13:39:40
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catjaja

金虫 (著名写手)

bernadat(金币+1): 2010-03-17 08:51
指纹图谱和高效液相色谱根本就是两码事,同ls所说

一般做中药材指纹图谱用毛细管电泳最为合适,没用毛细管的就用液相
3楼2010-03-13 14:54:13
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swt1898

铁虫 (著名写手)

学习了,楼上很详细
5楼2010-03-13 21:44:09
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