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xiaokuan4185

铁虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】请教E.coli中如何根据OD420的吸光值测beta-半乳糖苷酶的活性

请教：E.coli中如何根据OD420的吸光值测beta-半乳糖苷酶的活性。
E.coli破碎与ONPG的反应，然后测出OD420的吸光值。用哪个公式可以把OD420的吸光值转换成beta-半乳糖苷酶的活性。谢谢高手指点。

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bluesky

1楼 2010-03-13 10:34:14

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HarveyWang

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-03-14 11:28

引用回帖:

Originally posted by xiaokuan4185 at 2010-03-13 10:34:14:
请教：E.coli中如何根据OD420的吸光值测beta-半乳糖苷酶的活性。
E.coli破碎与ONPG的反应，然后测出OD420的吸光值。用哪个公式可以把OD420的吸光值转换成beta-半乳糖苷酶的活性。谢谢高手指点。

（1）首先，你需要其水解产物ONP的微摩尔消光系数。
如果查不到，就用AR级的ONP做标线，求得此值。
注意ONP光吸收曲线受到buffer pH的影响，要用你的反应体系Buffer来溶解，
例如100 mM KH2PO4-NaOH pH6.5.

母液可配置 2000 uM，用Buffer稀释到50-1000 uM，一系列梯度，做线性，可得其微摩尔消光系数，我做的是OD415=0.935/1000 uM.

(2)测定样品中的蛋白含量，即X g/L 蛋白。
最好要很准确，这个结果直接影响你酶活计算结果的准确性。

（3）加入不同量的酶在反应体系，计算δA415/min 变化，要知道在多少变化速率内你的不同量的酶跟其速率成正比！

（4）根据酶比活公式计算比活。自己推理吧。
这个要看你的反应体积大小，我的公式不一定适合你的。

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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】

3楼2010-03-14 11:26:03