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guona0329木虫 (小有名气)
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[交流]
【求助】肝微粒体制备相关问题
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各位好： 本人最近刚刚接触肝微粒体制备技术，在制备过程中有些小问题困扰着我，希望有仙人指路，但因囊中羞涩，区区薄礼，不成敬意，还望笑纳！ Q1：在门静脉灌流注射过程中，如何达到在冰上操作的要求？是先将大鼠的肝取下进行吧？ Q2：因为肝微粒体经过超高速离心，已经成块状，如何在不影响活性的前提下将其很好的悬浮？如果分散的不均匀，检测出的蛋白含量是很不准确的吧！ Q3: 看了几篇关于检测肝微粒体酶活的方法的文献，就是想知道如何实现充入CO？有专用的仪器吗？ 问题可能会很白痴，但是的确是初学者发自肺腑的心声，要笑就请偷偷的笑吧，但是笑过之后，请您留下您的答案~~~~~~ 最好哪位热心人，给我留下宝贵的联系方式，以便更方便的赐教，小女子在此谢过！ PS：如果觉得在大庭广众之下公开联系方式不妥，可以以短消息的方式哦*^__^* [ Last edited by guona0329 on 2010-3-13 at 07:36 ] |
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guona0329
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 红花: 1
- 帖子: 283
- 在线: 76.2小时
- 虫号: 531732
- 注册: 2008-03-24
- 性别: MM
- 专业: 植物资源学
5楼2010-03-21 10:55:46
corrinejiang
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 金币: 1321.4
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- 虫号: 533332
- 注册: 2008-03-26
- 专业: 药物分析
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guona0329(金币+30):多谢赐教，受益匪浅！ 2010-03-19 19:01
472514568(金币+1):谢谢回帖！ 2010-03-21 00:25
guona0329(金币+30):多谢赐教，受益匪浅！ 2010-03-19 19:01
472514568(金币+1):谢谢回帖！ 2010-03-21 00:25
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因为我做微粒体的时候没有做门静脉冲洗那一步，所以对于问题1就不回答了。因为我不是药理专业的学生，对解剖这个东西不太了解，就没有冲洗残留的血。不过我觉得影响不大。 问题2，如何悬浮好。其实很简单，用滴管或是移液器慢慢的吹打就行，不会影响活性的。不过一定要吹打均匀。 问题3，如何通CO。没有什么特殊的仪器，我们就是用那种氧气袋买的。连上一根乳胶管，前面要弄个针头或是什么细细的东西，要不不好放到比色皿中。需要注意的就是通气的速度和时间，不能太快，要不蛋白就会变性了，现象是会有很多泡沫冒出。一般每秒5个泡泡，通20-30s就够了。不过你也可以考察一下最优条件。 |
3楼2010-03-18 15:41:37
4楼2010-03-20 22:52:06
