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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】肝微粒体制备相关问题
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guona0329

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助】肝微粒体制备相关问题

各位好：
    本人最近刚刚接触肝微粒体制备技术，在制备过程中有些小问题困扰着我，希望有仙人指路，但因囊中羞涩，区区薄礼，不成敬意，还望笑纳！
Q1：在门静脉灌流注射过程中，如何达到在冰上操作的要求？是先将大鼠的肝取下进行吧？
Q2：因为肝微粒体经过超高速离心，已经成块状，如何在不影响活性的前提下将其很好的悬浮？如果分散的不均匀，检测出的蛋白含量是很不准确的吧！
Q3: 看了几篇关于检测肝微粒体酶活的方法的文献，就是想知道如何实现充入CO？有专用的仪器吗？
    问题可能会很白痴，但是的确是初学者发自肺腑的心声，要笑就请偷偷的笑吧，但是笑过之后，请您留下您的答案~~~~~~
       最好哪位热心人，给我留下宝贵的联系方式，以便更方便的赐教，小女子在此谢过！
PS：如果觉得在大庭广众之下公开联系方式不妥，可以以短消息的方式哦*^__^*

[ Last edited by guona0329 on 2010-3-13 at 07:36 ]
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幸福就在你身边~~~
1楼 2010-03-12 23:06:37
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guona0329

木虫 (小有名气)
2楼2010-03-16 21:21:55
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corrinejiang

金虫 (正式写手)
★
guona0329(金币+30):多谢赐教，受益匪浅！ 2010-03-19 19:01
472514568(金币+1):谢谢回帖！ 2010-03-21 00:25
因为我做微粒体的时候没有做门静脉冲洗那一步，所以对于问题1就不回答了。因为我不是药理专业的学生，对解剖这个东西不太了解，就没有冲洗残留的血。不过我觉得影响不大。

问题2，如何悬浮好。其实很简单，用滴管或是移液器慢慢的吹打就行，不会影响活性的。不过一定要吹打均匀。

问题3，如何通CO。没有什么特殊的仪器，我们就是用那种氧气袋买的。连上一根乳胶管，前面要弄个针头或是什么细细的东西，要不不好放到比色皿中。需要注意的就是通气的速度和时间，不能太快，要不蛋白就会变性了，现象是会有很多泡沫冒出。一般每秒5个泡泡，通20-30s就够了。不过你也可以考察一下最优条件。
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3楼2010-03-18 15:41:37
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程程9122

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
472514568(金币+1):谢谢回帖！ 2010-03-21 00:25
1，最好是在摘取肝脏之前先进行门静脉灌流，我一般先将灌流液在冰箱里放置一段时间。这样肝脏中的血液能被冲洗出来，摘下之后残血比较难冲干净
2。离心后微粒体成胶冻状，我一般用移液器的枪头或针头吹打，当然得保持低温，
3，我测蛋白含量一般用考马斯法，可能有局限，但比较方便
一起交流 探讨
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4楼2010-03-20 22:52:06
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guona0329

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 程程9122 at 2010-03-20 22:52:06:
1，最好是在摘取肝脏之前先进行门静脉灌流，我一般先将灌流液在冰箱里放置一段时间。这样肝脏中的血液能被冲洗出来，摘下之后残血比较难冲干净
2。离心后微粒体成胶冻状，我一般用移液器的枪头或针头吹打，当然得 ...

多谢，今后有问题多交流哈！
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幸福就在你身边~~~
5楼2010-03-21 10:55:46
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