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nlhnq55

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】无水乙醇污染DAN问题

最近做微生物多样性检测试验。将无水乙醇100倍稀释后,作为pcr模板,使用16S通用引物扩增。结果发现出现阳性条带。然后同样处理的异丙醇异丁醇等,出现同样的结果。
一般实验认为这些有机溶剂不会存在菌或酶的污染,但会不会存在DNA的污染呢
有做过相似实验的同学吗?急求请帮助验证啊
基因组提取过程一般都要用到以上这些试剂,那么会不会导致模板的污呢
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-11 18:04
请问你是否跑了空白对照呢,据我分析,不是醇的问题,估计即使只跑水也会有带,所以水污染的可能性更大一些
2楼2010-03-11 17:15:25
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nlhnq55

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-11 17:15:25:
请问你是否跑了空白对照呢,据我分析,不是醇的问题,估计即使只跑水也会有带,所以水污染的可能性更大一些

嗯,同时做了水的空白对照,水对应的是阴性结果,无水乙醇和异丙醇对应的是阳性条带
无穷般若心自在,语默动静体自然
3楼2010-03-11 17:29:36
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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……何必纠结,换新的不就得了……旧的拿来当消毒用
4楼2010-03-11 18:40:56
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xrr1988

金虫 (正式写手)


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把水灭菌一下,前两天我做也出现了污染情况,后来灭菌了以后又在超净台做,阴性对照就没有出来条带了
5楼2010-03-11 19:49:36
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户


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曾经也做过细菌16srDNA的扩增,也遇到污染的情况,很难解决,空白总是出现条带,或多或少。
金币是赌出来的
6楼2010-03-12 13:21:34
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nlhnq55

银虫 (小有名气)

水等都没有问题
使用了新买的无水乙醇(天津产的),及别人实验室的无水乙醇(均是国产),都得到一样的结果
如果国产的有机溶剂都是这个样子,那么很多文章的DNA提取结果岂不是都存在疑问?
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7楼2010-03-12 18:17:26
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nlhnq55

银虫 (小有名气)

诸位实验室使用的无水乙醇都是国外进口的吗?
sigma的200ml要800多,国产的500ml才20元。难道差别这么大?
无穷般若心自在,语默动静体自然
8楼2010-03-12 18:19:32
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



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乙醇 应该没问题

还是从水 上找原因,灭菌。

用试剂盒提吧
9楼2010-03-14 10:45:52
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


国药 的 无水乙醇。
10楼2010-03-14 10:46:22
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