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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】无水乙醇污染DAN问题
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nlhnq55

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】无水乙醇污染DAN问题

最近做微生物多样性检测试验。将无水乙醇100倍稀释后，作为pcr模板，使用16S通用引物扩增。结果发现出现阳性条带。然后同样处理的异丙醇异丁醇等，出现同样的结果。
一般实验认为这些有机溶剂不会存在菌或酶的污染，但会不会存在DNA的污染呢
有做过相似实验的同学吗？急求请帮助验证啊
基因组提取过程一般都要用到以上这些试剂，那么会不会导致模板的污呢
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无穷般若心自在，语默动静体自然
1楼 2010-03-11 16:56:04
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-11 18:04
请问你是否跑了空白对照呢，据我分析，不是醇的问题，估计即使只跑水也会有带，所以水污染的可能性更大一些
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2楼2010-03-11 17:15:25
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nlhnq55

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-11 17:15:25:
请问你是否跑了空白对照呢，据我分析，不是醇的问题，估计即使只跑水也会有带，所以水污染的可能性更大一些

嗯，同时做了水的空白对照，水对应的是阴性结果，无水乙醇和异丙醇对应的是阳性条带
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无穷般若心自在，语默动静体自然
3楼2010-03-11 17:29:36
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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……何必纠结，换新的不就得了……旧的拿来当消毒用
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4楼2010-03-11 18:40:56
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xrr1988

金虫 (正式写手)
★
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把水灭菌一下，前两天我做也出现了污染情况，后来灭菌了以后又在超净台做，阴性对照就没有出来条带了
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5楼2010-03-11 19:49:36
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
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曾经也做过细菌16srDNA的扩增，也遇到污染的情况，很难解决，空白总是出现条带，或多或少。
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金币是赌出来的
6楼2010-03-12 13:21:34
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nlhnq55

银虫 (小有名气)
水等都没有问题
使用了新买的无水乙醇（天津产的），及别人实验室的无水乙醇（均是国产），都得到一样的结果
如果国产的有机溶剂都是这个样子，那么很多文章的DNA提取结果岂不是都存在疑问？
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无穷般若心自在，语默动静体自然
7楼2010-03-12 18:17:26
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nlhnq55

银虫 (小有名气)
诸位实验室使用的无水乙醇都是国外进口的吗？
sigma的200ml要800多，国产的500ml才20元。难道差别这么大？
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无穷般若心自在，语默动静体自然
8楼2010-03-12 18:19:32
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
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乙醇 应该没问题

还是从水 上找原因，灭菌。

用试剂盒提吧
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9楼2010-03-14 10:45:52
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
国药 的 无水乙醇。
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10楼2010-03-14 10:46:22
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