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arniekyo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】双酶切效果不好

我最近用了fermentas公司的酶Xho1和Mlu1双酶切我的载体。载体上连接有我的目的基因,已经测序完全正确,但是用着两个酶进行双酶切的时候,切出来的电泳检测,全切散了,看不到带的迹象。50ul,25ul的体系都做过了,酶切时间也从8-14小时不等,但是结果还是很不好,希望能给出指点
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yuanfeng

金虫 (小有名气)

会不会时间太长了些
3楼2010-03-10 15:58:20
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)

建议你上个图看看
2楼2010-03-10 15:46:12
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漫迹

金虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-10 18:23
要是有拖尾现象的话,那就可能是切得时间太长了
4楼2010-03-10 16:07:46
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 2010-03-10 18:23
切弥散我们实验室也经常出现这个问题,可能是酶的原因,也可能是质粒提取的不好。
建议换旁边的酶切切看,看是否有弥散。
另外提质粒的时候,洗脱前建议让残留乙醇尽量挥发干净(我们的做法是烘箱敞口烘5-10 min)。
Thank-you,so-blue.
5楼2010-03-10 16:14:06
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