24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 847  |  回复: 8
当前主题已经存档。

arniekyo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】双酶切效果不好

我最近用了fermentas公司的酶Xho1和Mlu1双酶切我的载体。载体上连接有我的目的基因,已经测序完全正确,但是用着两个酶进行双酶切的时候,切出来的电泳检测,全切散了,看不到带的迹象。50ul,25ul的体系都做过了,酶切时间也从8-14小时不等,但是结果还是很不好,希望能给出指点
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

微笑漩涡

新虫 (著名写手)

建议你上个图看看
2楼2010-03-10 15:46:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanfeng

金虫 (小有名气)

会不会时间太长了些
3楼2010-03-10 15:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漫迹

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-10 18:23
要是有拖尾现象的话,那就可能是切得时间太长了
4楼2010-03-10 16:07:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-03-10 18:23
切弥散我们实验室也经常出现这个问题,可能是酶的原因,也可能是质粒提取的不好。
建议换旁边的酶切切看,看是否有弥散。
另外提质粒的时候,洗脱前建议让残留乙醇尽量挥发干净(我们的做法是烘箱敞口烘5-10 min)。
Thank-you,so-blue.
5楼2010-03-10 16:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

………………切那么长时间……降解了吧,或者星活性
我最长都没有切超过3h
6楼2010-03-10 18:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Charlie1331

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
第一,目的基因内部有没有再次确认过无上述两种酶切位点;第二,这两种酶不是很常用,有没有注意到其最适温度?第三,时间是长了点……一般3-5h差不多了。
7楼2010-03-10 22:41:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

特洛伊

金虫 (小有名气)

同意7楼的观点
成本
8楼2010-03-11 10:21:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

arniekyo

铜虫 (小有名气)

这个问题已经解决了,我把酶的用量,酶切时间减少了一些,效果很好。谢谢大家
9楼2010-03-16 11:03:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 arniekyo 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +22 慕绝cc 2026-04-09 26/1300 2026-04-14 13:14 by wanganpin
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +5 喽哈加油 2026-04-13 5/250 2026-04-14 10:15 by 求调剂zz
[考研] 材料工程085601,270求调剂 +41 @ASDF1234 2026-04-08 44/2200 2026-04-14 09:23 by barlinike
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 300分求调剂 (085501机械专硕,本科扬大) +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu~
[考研] 332求调剂 +15 蕉蕉123 2026-04-10 15/750 2026-04-13 23:12 by pies112
[考研] 求调剂 +9 吃口冰激凌 2026-04-07 9/450 2026-04-13 08:46 by 紫曦紫棋
[考研] 2本,初试303,0860求调剂 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
[考研] 电气工程专硕320求调剂 +5 小麻子111 2026-04-10 5/250 2026-04-12 10:47 by zhouyuwinner
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 267求调剂 +8 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:42 by cfdbai
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 275求调剂 +9 1624447980 2026-04-08 10/500 2026-04-11 10:20 by Delta2012
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 一志愿京区985,085401,与本科专业一致,电子信息工程, +4 阳光开朗的男孩 2026-04-10 4/200 2026-04-10 18:27 by shenrf
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 青岛科技大学材料学院,环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
[考研] 求调剂 +13 柒luck 2026-04-07 13/650 2026-04-08 22:46 by 猪会飞
信息提示
请填处理意见