应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切效果不好
91/1返回列表
查看: 808  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

arniekyo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】双酶切效果不好

我最近用了fermentas公司的酶Xho1和Mlu1双酶切我的载体。载体上连接有我的目的基因，已经测序完全正确，但是用着两个酶进行双酶切的时候，切出来的电泳检测，全切散了，看不到带的迹象。50ul，25ul的体系都做过了，酶切时间也从8-14小时不等，但是结果还是很不好，希望能给出指点
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-03-10 14:50:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

微笑漩涡

新虫 (著名写手)
建议你上个图看看
赞一下 回复此楼
2楼2010-03-10 15:46:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanfeng

金虫 (小有名气)
会不会时间太长了些
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-10 15:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漫迹

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-10 18:23
要是有拖尾现象的话，那就可能是切得时间太长了
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-03-10 16:07:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-03-10 18:23
切弥散我们实验室也经常出现这个问题，可能是酶的原因，也可能是质粒提取的不好。
建议换旁边的酶切切看，看是否有弥散。
另外提质粒的时候，洗脱前建议让残留乙醇尽量挥发干净（我们的做法是烘箱敞口烘5-10 min）。
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
5楼2010-03-10 16:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
………………切那么长时间……降解了吧，或者星活性
我最长都没有切超过3h
赞一下 回复此楼
6楼2010-03-10 18:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Charlie1331

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第一，目的基因内部有没有再次确认过无上述两种酶切位点；第二，这两种酶不是很常用，有没有注意到其最适温度？第三，时间是长了点……一般3-5h差不多了。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-03-10 22:41:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

特洛伊

金虫 (小有名气)
同意7楼的观点
回复此楼
成本
8楼2010-03-11 10:21:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

arniekyo

铜虫 (小有名气)
这个问题已经解决了，我把酶的用量，酶切时间减少了一些，效果很好。谢谢大家
赞一下 回复此楼
9楼2010-03-16 11:03:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 arniekyo 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +6 Auroracx 2026-03-22 6/300 2026-03-22 11:43 by chixmc
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +7 梨花珞晚风 2026-03-17 7/350 2026-03-22 10:03 by 2026paper
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +10 枫桥ZL 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:02 by peike
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 baibai1314 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:56 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭