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hfztim
至尊木虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
落明逐暗(金币+1):谢谢指点！ 2010-03-10 09:58
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
落明逐暗(金币+1):谢谢指点！ 2010-03-10 09:58
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也就是所谓的引导合成法。 本方法是 Okayama 和 Berg 1982 提出的。首先是制备一端带有 Poly（dG）的片段 Ⅱ 和带有 Poly（dT）的载体片段 Ⅰ ，并用片段 Ⅰ 来代替 Oligo（dT）进行 cDNA 第一链的合成，在第一链 cDNA 合成后直接采用末端转移酶（TdT）在第一链 cDNA 的 3'-端加上一段 Poly（dC）的尾巴，同时进行酶切创造出另一端的粘端，与片段 Ⅱ 一起形成环化体，这种环化了的杂合双链在 RNA 酶 H 、大肠杆菌 DNA 聚合酶 Ⅰ 和 DNA 连接酶的作用下合成与载体联系在一起的双链 cDNA 。其主要特点是合成全长 cDNA 的比例较高，但操作比较复杂，形成的 cDNA 克隆中都带有一段 Poly（dC）/（dA），对重组子的复制和测序都不利。 |
2楼2010-03-09 11:54:29