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yujiaping1

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】测序,T7引物套峰问题

PGEM T-easy载体测序,为什么只有SP6引物的结果好,T7引物为什么套峰严重,公司自己测了两次,结果都差不多,存在严重套峰现象。另外,TOPO载体的也试了,M13F引物也不存在问题,T7引物也不行。换引物会不会有效,PGEM T-easy载体,大家都用什么引物测序?

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-9 at 16:59 ]
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

自己顶一下
2楼2010-03-09 08:45:19
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van0735

铁杆木虫 (小有名气)

yujiaping1(金币+2): 2010-03-09 16:59
我以前也用过SP6和T7,发现T7不如SP6效率高,建议楼主把T7换成T3试试,如果还是不行,就将目的序列一正一反插到载体中,都用SP6测序,祝你成功!
3楼2010-03-09 09:28:01
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by van0735 at 2010-03-09 09:28:01:
我以前也用过SP6和T7,发现T7不如SP6效率高,建议楼主把T7换成T3试试,如果还是不行,就将目的序列一正一反插到载体中,都用SP6测序,祝你成功!

请问如何将目的序列反过来插进去,我们都是随机插的,有正的,有反的,好像正的多一些,不知道如何才能控制正反
4楼2010-03-09 17:01:21
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by van0735 at 2010-03-09 09:28:01:
我以前也用过SP6和T7,发现T7不如SP6效率高,建议楼主把T7换成T3试试,如果还是不行,就将目的序列一正一反插到载体中,都用SP6测序,祝你成功!

TOPO载体没有T3区
5楼2010-03-09 19:21:09
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van0735

铁杆木虫 (小有名气)

yujiaping1(金币+1):谢谢,看来这个要碰运气 2010-03-11 13:13
插入的正反顺序的确不好控制,但是可以多挑几个单克隆送测序,肯定会有正向插入也有反向插入的,因为这个毕竟不是小概率事件,以前我做的时候一般送4个克隆,至少有一个是反向插入的,我想楼主的运气应该不会差,呵呵,祝好运!
6楼2010-03-11 08:40:14
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

yujiaping1(金币+1):谢谢,换了个M13F,公司正在给测 2010-03-11 13:12
yujiaping1(金币+1): 2010-03-12 22:08
既然T7不好用,为什么非要用T7呢?M13F、M13R不都可以吗?
有可能T7跟你的插入片段上某处有退火
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
7楼2010-03-11 13:10:42
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

问题已经解决,谢谢大家,用M13R引物,不存在套峰了,结果很漂亮
8楼2010-03-12 22:08:24
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