应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序，T7引物套峰问题
81/1返回列表
查看: 542  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

yujiaping1

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】测序，T7引物套峰问题

PGEM T-easy载体测序，为什么只有SP6引物的结果好，T7引物为什么套峰严重，公司自己测了两次，结果都差不多，存在严重套峰现象。另外，TOPO载体的也试了，M13F引物也不存在问题，T7引物也不行。换引物会不会有效，PGEM T-easy载体，大家都用什么引物测序？

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-9 at 16:59 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-03-08 21:36:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
自己顶一下
回复此楼
2楼2010-03-09 08:45:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

van0735

铁杆木虫 (小有名气)
yujiaping1(金币+2): 2010-03-09 16:59
我以前也用过SP6和T7，发现T7不如SP6效率高，建议楼主把T7换成T3试试，如果还是不行，就将目的序列一正一反插到载体中，都用SP6测序，祝你成功！
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-09 09:28:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by van0735 at 2010-03-09 09:28:01:
我以前也用过SP6和T7，发现T7不如SP6效率高，建议楼主把T7换成T3试试，如果还是不行，就将目的序列一正一反插到载体中，都用SP6测序，祝你成功！

请问如何将目的序列反过来插进去，我们都是随机插的，有正的，有反的，好像正的多一些，不知道如何才能控制正反
赞一下 回复此楼
4楼2010-03-09 17:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by van0735 at 2010-03-09 09:28:01:
我以前也用过SP6和T7，发现T7不如SP6效率高，建议楼主把T7换成T3试试，如果还是不行，就将目的序列一正一反插到载体中，都用SP6测序，祝你成功！

TOPO载体没有T3区
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-09 19:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

van0735

铁杆木虫 (小有名气)
yujiaping1(金币+1):谢谢，看来这个要碰运气 2010-03-11 13:13
插入的正反顺序的确不好控制，但是可以多挑几个单克隆送测序，肯定会有正向插入也有反向插入的，因为这个毕竟不是小概率事件，以前我做的时候一般送4个克隆，至少有一个是反向插入的，我想楼主的运气应该不会差，呵呵，祝好运！
赞一下 回复此楼
6楼2010-03-11 08:40:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
yujiaping1(金币+1):谢谢，换了个M13F，公司正在给测 2010-03-11 13:12
yujiaping1(金币+1): 2010-03-12 22:08
既然T7不好用，为什么非要用T7呢？M13F、M13R不都可以吗？
有可能T7跟你的插入片段上某处有退火
赞一下 回复此楼
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
7楼2010-03-11 13:10:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
问题已经解决，谢谢大家，用M13R引物，不存在套峰了，结果很漂亮
赞一下 回复此楼
8楼2010-03-12 22:08:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yujiaping1 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +6 Auroracx 2026-03-22 6/300 2026-03-22 11:43 by chixmc
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +5 纸鱼ly 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:11 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸！ 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭