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度百

铁杆木虫 (正式写手)

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虫号: 897115

[资源] 【分享】总RNA 的提取

Trizol 法提取RNA
在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存，
则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时，将储
存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，
以避免RNase 的作用。
1. 提取组织 RNA 时，每50～100mg 组织用1ml Trizol 试剂对组织进行裂解；提
取细胞RNA 时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106 个细胞加1ml Trizol 后，反
复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；
2. 将上述组织或细胞的 Trizol 裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5 分钟；
3. 在上述 EP 管中，按照每1ml TRIZOL 加0.2ml 氯仿的量加入氯仿，盖上EP
管盖子，在手中用力震荡15 秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3 分钟后，
12000g（2℃～8℃）离心15 分钟；
4. 取上层水相置于新 EP 管中,按照每1ml TRIZOL 加0.5ml 异丙醇的量加入异丙
醇，在室温下（15℃～30℃）放置10 分钟,12000g（2℃～8℃）离心10 分钟；
5. 弃上清，按照每 1ml TRIZOL 加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g
（2℃～8℃）离心5 分钟，弃上清；
6. 让沉淀的 RNA 在室温下自然干燥；
7. 用 Rnase-free water 溶解RNA 沉淀。

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