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【分享】总RNA 的提取
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Trizol 法提取RNA 在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存， 则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时，将储 存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻， 以避免RNase 的作用。 1. 提取组织 RNA 时，每50～100mg 组织用1ml Trizol 试剂对组织进行裂解；提 取细胞RNA 时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106 个细胞加1ml Trizol 后，反 复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞； 2. 将上述组织或细胞的 Trizol 裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5 分钟； 3. 在上述 EP 管中，按照每1ml TRIZOL 加0.2ml 氯仿的量加入氯仿，盖上EP 管盖子，在手中用力震荡15 秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3 分钟后， 12000g（2℃～8℃）离心15 分钟； 4. 取上层水相置于新 EP 管中,按照每1ml TRIZOL 加0.5ml 异丙醇的量加入异丙 醇，在室温下（15℃～30℃）放置10 分钟,12000g（2℃～8℃）离心10 分钟； 5. 弃上清，按照每 1ml TRIZOL 加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g （2℃～8℃）离心5 分钟，弃上清； 6. 让沉淀的 RNA 在室温下自然干燥； 7. 用 Rnase-free water 溶解RNA 沉淀。 |
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