24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1348  |  回复: 18
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】taq酶P出来了,pfu却怎么也出不来?

如题,最近在P的一个基因,用taq酶出来清晰的条带,但是用pfu酶怎么也出不来,跑胶一片空白,两种酶P的反应体系一样,反应条件,taq为1min,pfu的延伸时间为2min,但就是没有条带,真让人崩溃!各位高手,看看可能是什么原因,先谢了
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最后的72度延长时间设置成你Taq酶P的时候的两倍,Pfu扩增能力没有Taq那么强。

要是改变了还不行的话就试试Takara的 EXtaq吧。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2010-03-08 14:43:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

yang0071

木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 2010-03-05 19:35
pfu酶本身对模板 引物 镁离子浓度的要求就比taq高
p不出来很正常的
改变镁离子浓度或者降低退火温度
2楼2010-03-05 18:36:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Charlie1331

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 2010-03-05 19:36
pfu由于是高保真酶,出错率比taq酶低很多,代价就是对条件的要求苛刻,而且不容易P,但是P出来的基本上都不会出错。推荐Takara公司的PrimerStar 蛮不错。
3楼2010-03-05 18:52:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2010-03-05 18:36:41:
pfu酶本身对模板 引物 镁离子浓度的要求就比taq高
p不出来很正常的
改变镁离子浓度或者降低退火温度

请问为什么要降低退火温度,改变退火时间有影响吗
4楼2010-03-08 09:29:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 320求调剂 +6 深郊akm 2026-04-17 6/300 2026-04-20 18:57 by fs26jie
[论文投稿] 期刊推荐 +3 材料研究生 2026-04-15 5/250 2026-04-20 16:02 by 豆豆7758
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +15 河南农业大学-能 2026-04-14 15/750 2026-04-20 12:39 by Equinoxhua
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 5/250 2026-04-20 10:47 by YuY66
[考研] 通信工程求调剂!!! +7 zlb770521 2026-04-14 7/350 2026-04-19 20:56 by Equinoxhua
[考研] 297,工科调剂? +11 河南农业大学-能 2026-04-14 11/550 2026-04-19 20:07 by Equinoxhua
[考研] 求调剂推荐 +9 小聂爱学习 2026-04-14 9/450 2026-04-19 17:03 by 中豫男
[考研] 291求调剂 +12 关忆北. 2026-04-14 13/650 2026-04-19 16:50 by 中豫男
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +10 lzmk 2026-04-14 11/550 2026-04-19 16:42 by 中豫男
[考研] 307中医考研调剂 +9 于以采蘩 2026-04-14 9/450 2026-04-19 08:41 by 烟雨流涯
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 22408 312求调剂 +24 门路摸摸 2026-04-14 26/1300 2026-04-18 13:04 by wunaiy88
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
信息提示
请填处理意见