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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RNA 定量问题
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pidou

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RNA 定量问题 已有2人参与

有如下问题 想请教：
1、比色皿需要灭菌和灭RNase吗？？
2、RNA需要用什么稀释呢？稀释多少倍比较好？有定值吗？
3、用什么做参比比较好？？DEPC水还是TE比较好？
4、实验分度需要必须在25度吗？

谢谢大家了，期待大家的交流和成长...
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1楼 2010-03-05 00:17:21
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
1949stone(金币+2): 2010-03-05 23:36
pidou(金币+1):谢谢你哦 2010-03-06 21:22
1、不用，就取一点出来测。不过我们的皿都是泡无水乙醇的。
2、用水。DEPC水或者超纯水都好，反正RNA原液只占最后测量体系的1/100左右。我一般稀释100倍。
3、你用什么稀释就用什么做参比。但如果RNA用TE溶解，那么稀释的时候建议还是TE，参比也用TE。这些盐相对纯水来说会拉低OD值。
4、一般不需要。
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2楼2010-03-05 08:48:50
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pidou

木虫 (正式写手)
请问你们的RNA测定一般在多少就可以做后续工作了？？譬如RACE
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-03-05 08:48:50:
1、不用，就取一点出来测。不过我们的皿都是泡无水乙醇的。
2、用水。DEPC水或者超纯水都好，反正RNA原液只占最后测量体系的1/100左右。我一般稀释100倍。
3、你用什么稀释就用什么做参比。但如果RNA用TE溶解， ...

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3楼2010-04-11 16:50:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
RACE的话最好能够浓一点了，最好用上试剂盒推荐的最大量
然后OD值的话就确实要严格点，1.8~2.0，否则会比较麻烦
因为RACE试剂盒很贵，所以在RNA的质控上要严格些，避免不必要的浪费
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4楼2010-04-11 18:24:26
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