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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】分子量与设计相差甚远，望大家指点迷津!
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theoneme

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】分子量与设计相差甚远，望大家指点迷津!

我做一个蛋白质的克隆表达，设计时是96个氨基酸，序列测定显示起始密码子，终止密码子，碱基序列均正确，蛋白质分子量软件估算为10000.94，但诱导表达后表达条带明显，电泳显示在25kd左右，换marker显示在30kd左右，对菌体破碎纯化，比较容易获得诱导出的蛋白质，电泳也在25kd附近，然后对其凝胶排阻脱盐，质谱测定其分子量显示在28848.14，小弟百思不得其解，望各位大侠指点迷津！
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1楼 2010-03-04 16:25:09
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-03-04 21:40
你确定在一万左右没有带吗？有可能表达量比较低，带不明显呢。另一种可能是软件毕竟是软件，不一定很准滴……
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2楼2010-03-04 16:33:18
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theoneme

新虫 (初入文坛)
25kd附近的带对比未诱导的表达很明显，大概占到总蛋白的30%，10kd附近无明显差异，谢谢回复！
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3楼2010-03-04 16:42:05
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
是不是ORF不对
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4楼2010-03-04 21:29:36
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1): 2010-03-04 21:40
多聚体也有可能
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5楼2010-03-04 21:30:07
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theoneme

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-03-04 16:59:36:
是不是ORF不对

我已经仔细对比过，正向反向都测过序列，可以肯定ORF正确，谢谢您的回复！
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6楼2010-03-05 16:46:56
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theoneme

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-03-04 17:00:07:
多聚体也有可能

多聚体的话跑SDS-page电泳应该能解聚，而且多聚体分子量也对不上，谢谢您的回复！
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7楼2010-03-05 16:48:23
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