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theoneme

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】分子量与设计相差甚远,望大家指点迷津!

我做一个蛋白质的克隆表达,设计时是96个氨基酸,序列测定显示起始密码子,终止密码子,碱基序列均正确,蛋白质分子量软件估算为10000.94,但诱导表达后表达条带明显,电泳显示在25kd左右,换marker显示在30kd左右,对菌体破碎纯化,比较容易获得诱导出的蛋白质,电泳也在25kd附近,然后对其凝胶排阻脱盐,质谱测定其分子量显示在28848.14,小弟百思不得其解,望各位大侠指点迷津!
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Charlie1331

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-03-04 21:40
你确定在一万左右没有带吗?有可能表达量比较低,带不明显呢。另一种可能是软件毕竟是软件,不一定很准滴……
2楼2010-03-04 16:33:18
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theoneme

新虫 (初入文坛)

25kd附近的带对比未诱导的表达很明显,大概占到总蛋白的30%,10kd附近无明显差异,谢谢回复!
3楼2010-03-04 16:42:05
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

是不是ORF不对
4楼2010-03-04 21:29:36
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


amisking(金币+1): 2010-03-04 21:40
多聚体也有可能
5楼2010-03-04 21:30:07
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theoneme

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-03-04 16:59:36:
是不是ORF不对

我已经仔细对比过,正向反向都测过序列,可以肯定ORF正确,谢谢您的回复!
6楼2010-03-05 16:46:56
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theoneme

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-03-04 17:00:07:
多聚体也有可能

多聚体的话跑SDS-page电泳应该能解聚,而且多聚体分子量也对不上,谢谢您的回复!
7楼2010-03-05 16:48:23
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