| 查看: 261 | 回复: 2 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 微笑漩涡 的 4 个金币 | |||
微笑漩涡新虫 (著名写手)
|
[交流]
【求助/交流】做过TAIL-PCR的大侠帮忙哈
|
||
|
最近做兼并PCR获得一个约500bp的核酸片段，想通过TAIL-PCR获得全长。 但是不知道在这个PCR中 低退火温度的随机引物（AD）如何设计。 我的基因组是宏基因组，不能确定物种。 劳烦做过的大侠回答。谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有242人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
2楼2010-03-06 09:52:58
★ ★ ★
1949stone(金币+3): 2010-03-06 20:48
1949stone(金币+3): 2010-03-06 20:48
|
不好意思，我误导你了，我做的时候就是用刘的那个随机引物，但是换其他物种不一定能够做出来， 可以根据已知序列设计3 个与其边界距离不等的嵌套的特异性引物,特异性引物的长度约20 bp , Tm 一般为58～68 ℃。再按照物种普遍存在的蛋白质的保守氨基酸序列设计一系列简并引物,简并引物相对较短,长度为14 bp , Tm 为30～48 ℃。 兼并引物你会设计吧，用你要扩增的物种的近缘物种的蛋白质序列进行blast，找出保守序列，用primer primer5.0把保守的氨基酸反过来翻译成核酸的兼并序列， 获得侧翼序列除了tail-PCR还有genome walking（就是酶切之后加接头的那种） |
3楼2010-03-06 20:35:32