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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】两个基因在大肠杆菌中表达的问题
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jackiechan

木虫 (小有名气)
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11楼2010-03-04 20:39:01
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泡泡9706

银虫 (小有名气)
pET-Duet-1
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12楼2010-03-04 21:23:39
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HarveyWang

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海外行者
引用回帖:
Originally posted by jackiechan at 2010-03-04 09:00:28:
想把两个基因都通过质粒转入大肠杆菌,一定需要用两种质粒(不同的抗生素标记)吗?可以用一个质粒来做吗?请指点!

不可以。
只要一种有抗性的质粒转入，宿主就可以生长了。

Amp 、Kana抗性不是很好搞定的嘛
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
13楼2010-03-05 10:02:57
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
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引用回帖:
Originally posted by jackiechan at 2010-03-04 10:09:24:
我实际上目的是通过表达代谢途径中的一个关键酶(由这个基因表达)达到使产物合成量增加的目的,而并非为了得到这个基因的产物,是不是将目的基因转入大肠杆菌基因组较好啊,这是不是比较难呀

原来是途径改造啊，当然是插入宿主基因组啦！
这也是很成熟的技术啦，自己去找材料吧。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
14楼2010-03-05 10:06:29
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gandalf886

银虫 (小有名气)
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引用回帖:
Originally posted by jackiechan at 2010-03-04 10:09:24:
我实际上目的是通过表达代谢途径中的一个关键酶(由这个基因表达)达到使产物合成量增加的目的,而并非为了得到这个基因的产物,是不是将目的基因转入大肠杆菌基因组较好啊,这是不是比较难呀

用一个载体表达就可以了，用overlapPCR的方法将两个基因连起来，造成一个操纵子的结构，具体如下：promoter-RBS1-ORF1-RBS2-ORF2-terminator
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15楼2010-03-05 13:57:17
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jackiechan

木虫 (小有名气)
谢谢,再找找资料把
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16楼2010-03-06 21:32:18
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