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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】两个基因在大肠杆菌中表达的问题
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jackiechan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】两个基因在大肠杆菌中表达的问题

想把两个基因都通过质粒转入大肠杆菌,一定需要用两种质粒(不同的抗生素标记)吗?可以用一个质粒来做吗?请指点!
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1楼 2010-03-04 09:00:28
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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你说的不详细
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2楼2010-03-04 09:05:21
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jackiechan

木虫 (小有名气)
就是一定要将这两个基因分别转入两个质粒,在将这两个质粒转入大肠杆菌中表达,还是只需要将这两个基因转入同一个质粒中,再将这两个质粒转入大肠杆菌中表达?
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3楼2010-03-04 09:14:42
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
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amisking(金币+2): 2010-03-04 21:41
都可以吧，用一个质粒的话构建一个共表达载体就可以了，在多克隆位点选择不同的酶切位点依次连入你的基因，当然这时需要你的启动子启动能力较强。另外，现在已经有双多克隆位点的载体了，每个多克隆位点都有各自的启动子，那么构建起来就更方便了。
如果用两个质粒的话，那不再是不同抗生素的问题了，而是需要用到两个不同系列的载体。因为大肠杆菌同种系列的载体只能转入一种。
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Thank-you，so-blue.
4楼2010-03-04 09:23:42
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
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amisking(金币+2): 2010-03-04 21:41
如果两个基因的表达要求类似，而且大小不大，可以放在一个质粒中表达，但是，一般俩基因加起来就应该不小了……放在双质粒表达也可以，不过有一个表达稳定性的问题。
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5楼2010-03-04 09:43:00
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jackiechan

木虫 (小有名气)
非常受益,谢谢,
请问哪些是双多克隆位点的载体啊?另外,不同系列是否指象pet系列与pQE系列呀
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6楼2010-03-04 09:51:02
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silicare

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amisking(金币+3): 2010-03-04 21:41
呵呵，你还是没说明白，是不是后边又多大了个“两”字

分开吧，虽然大肠杆菌是多顺反子，但是中间的插入序列你没法把握，

而且连在一起的话你需要分开表达，而不是表达成一个融合蛋白

再者，你的蛋白需要标签纯化，而载体只能提供一个，两个基因怎么用？

所以

分开表达
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7楼2010-03-04 09:51:39
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jackiechan

木虫 (小有名气)
是不是可以分别用pet系列与pQE系列的载体表达啊
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8楼2010-03-04 09:56:43
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jackiechan

木虫 (小有名气)
我实际上目的是通过表达代谢途径中的一个关键酶(由这个基因表达)达到使产物合成量增加的目的,而并非为了得到这个基因的产物,是不是将目的基因转入大肠杆菌基因组较好啊,这是不是比较难呀
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9楼2010-03-04 10:09:24
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susizheng

木虫 (著名写手)

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引用回帖:
Originally posted by jackiechan at 2010-03-04 09:51:02:
非常受益,谢谢,
请问哪些是双多克隆位点的载体啊?另外,不同系列是否指象pet系列与pQE系列呀

http://d.namipan.com/d/37d970d9f ... 237bbe887fc07bc0200这个就是双多克隆位点的载体。
两个多克隆位点，有各自的启动子，有各自的纯化标签。
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Thank-you，so-blue.
10楼2010-03-04 15:20:58
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