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lwywenwen

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】提取中药毛状根中的RNA

小女子请教各位我用LICL法提取丹参毛状根中的RNA,提了N次都没有结果。不知道问题出在哪里,现我将我的实验步骤说明如下:
1. EP管,枪头等器具均用DEPC处理过夜,高压灭菌。研钵、玻璃器皿、镊子等在260度高温烘烤8小时。
2.LICL法所用试剂均严格用相关方法配制。玻璃容器均高温烘烤过。
3.在1.5ML  EP管中加入700ML 65度预热的RNA提取液,加入约0.1G 毛状根粉末,混合均匀,65度保温10分钟。
4.加入等体积的氯仿抽屉,4度,12000rpm离心10min
5.移出上清液,加入四分之一体积的10mol/L的Licl,4度放置过夜。
6.4度,12000rpm离心30min,弃上清,加入SSTE溶解5分钟,等体积氯仿抽提,加入2倍体积无水乙醇,-70度放置2h
7.4度,12000rpm离心20min,弃上清,沉淀用无水乙醇洗涤一次,超净台放5min,加20ulDEPC处理水,溶解。
8. 1.5%琼脂糖凝胶电泳。

我提了很多次,RNA的两条带都很模糊,有的时候都看不清有害是没有,师兄说是降解了,我好郁闷啊,求求哪位帮帮我
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beenomics

至尊木虫 (著名写手)

游戏人间的拙劣的造梦师

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-03 23:34
试试各公司的kit吧,据我所知,百泰克在提取植物RNA方面的产品很有竞争力。
在深深的迷茫中徘徊
3楼2010-03-03 16:15:15
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-03 23:34
所有溶液都要用DEPC处理过的水配置
抽提步骤很关键,要质不要量
电泳液也要DEPC处理的水配置,如果不处理,短时电泳也可以
2楼2010-03-03 15:25:20
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