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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提取中药毛状根中的RNA
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lwywenwen

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】提取中药毛状根中的RNA

小女子请教各位我用LICL法提取丹参毛状根中的RNA，提了N次都没有结果。不知道问题出在哪里，现我将我的实验步骤说明如下：
1. EP管，枪头等器具均用DEPC处理过夜，高压灭菌。研钵、玻璃器皿、镊子等在260度高温烘烤8小时。
2.LICL法所用试剂均严格用相关方法配制。玻璃容器均高温烘烤过。
3.在1.5ML  EP管中加入700ML 65度预热的RNA提取液，加入约0.1G 毛状根粉末，混合均匀，65度保温10分钟。
4.加入等体积的氯仿抽屉，4度，12000rpm离心10min
5.移出上清液，加入四分之一体积的10mol/L的Licl，4度放置过夜。
6.4度，12000rpm离心30min,弃上清，加入SSTE溶解5分钟，等体积氯仿抽提，加入2倍体积无水乙醇，-70度放置2h
7.4度，12000rpm离心20min,弃上清，沉淀用无水乙醇洗涤一次，超净台放5min,加20ulDEPC处理水，溶解。
8. 1.5%琼脂糖凝胶电泳。

我提了很多次，RNA的两条带都很模糊，有的时候都看不清有害是没有，师兄说是降解了，我好郁闷啊，求求哪位帮帮我
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1楼 2010-03-03 14:32:39
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-03 23:34
所有溶液都要用DEPC处理过的水配置
抽提步骤很关键，要质不要量
电泳液也要DEPC处理的水配置，如果不处理，短时电泳也可以
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2楼2010-03-03 15:25:20
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beenomics

至尊木虫 (著名写手)

游戏人间的拙劣的造梦师
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-03 23:34
试试各公司的kit吧，据我所知，百泰克在提取植物RNA方面的产品很有竞争力。
赞一下(2人) 回复此楼
在深深的迷茫中徘徊
3楼2010-03-03 16:15:15
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陈思容

铜虫 (正式写手)
坐等高手解答
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4楼2010-03-03 16:16:34
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