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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药剂学 » 【求助】G50 和 G100哪个流的快？
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对水过敏

铁虫 (小有名气)
★ ★
karl2100(金币+2):谢谢指点！ 2010-02-11 17:58
liujiahui(金币+3):thank you! 2010-02-11 22:48
引用回帖:
Originally posted by liujiahui at 2010-02-11 00:14:56:
昨天试着用了一下marker，分子量是1000的和2000的，结果分的很开。G50。

我想问，对于您所讲的用G10分开单糖，是指将单糖和盐分开，还是单糖和其他糖分开呢？盐在柱子里是什么时候出来的？

多谢！



好的，我说的就是单糖和盐分开，因为是个反应，所以产物比较确定，主要是分离的手段当时试了很久
通常情况呢，用的内径应该是5cm，长度不会很长，大概20-30cm
因为现在放假了，我都忘记了呵呵 想下，好像是100g溶胀后，直接装柱吧
盐是氯化钠或者是铵盐，按检测的结果，盐和糖靠的很近，没图表不好说，比如 上样10ml，每管大概5ml吧，一共10管左右 就能全部收集全，但盐可能出现在最后3管，最后三管部分就不能要了，因为是个反应，所以产物不纯，有可能最后三管，分子量太小，和盐分不开了
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鄙视我的人多了去了，你算老几啊！！！
11楼2010-02-11 16:33:48
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对水过敏

铁虫 (小有名气)
liujiahui(金币+3):thank you! 2010-02-11 22:52
引用回帖:
Originally posted by liujiahui at 2010-02-11 00:14:56:
昨天试着用了一下marker，分子量是1000的和2000的，结果分的很开。G50。

我想问，对于您所讲的用G10分开单糖，是指将单糖和盐分开，还是单糖和其他糖分开呢？盐在柱子里是什么时候出来的？

多谢！



我觉得看你说的，感觉你做的比我精细多了啊
自动收集也不是很贵的东西，应该很常见……但很能省力
柱子别太长，用到G25了都，这个时候长度的增加对分离效果的帮助就比较不明显
还有，用加压泵，有可能把填料都压缩在一起了，长度越长，填料的自重也有影响，这种柱子都要一次装好，不能分次
用改良的填料就可以用泵了，比如S100这样系列的，不过那些分的分子量范围都太大，，，你看传单上，生产用的凝胶，都是内径很大，长度不高
有想过使用阴离子纤维素么？能根据上面的电荷粗分，可能那样再上凝胶会好点
我们课题组是多糖的，多糖多是链状结构呢，凝胶照样能分开，应该没事呵呵
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鄙视我的人多了去了，你算老几啊！！！
12楼2010-02-11 16:43:46
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liujiahui

木虫 (著名写手)
多谢，

上一个帖子的基本都能看懂，但这个帖子里的内容就不是很明白：

1. 为什么说：“用到G25了都，这个时候长度的增加对分离效果的帮助就比较不明显” 呢？首先，为什么用的G25，长度就不明显，是说如果用的G100柱长就很重要吗？其次，为什么长度的增加不会帮助分离呢？

2. “用加压泵，有可能把填料都压缩在一起了”，这有什么不好的吗？我周围的人都教我装柱子要装紧，虽然他们都只装过硅胶柱，有什么本质差别吗？

再谢！
引用回帖:
Originally posted by 对水过敏 at 2010-02-11 16:43:46:

我觉得看你说的，感觉你做的比我精细多了啊
自动收集也不是很贵的东西，应该很常见……但很能省力
柱子别太长，用到G25了都，这个时候长度的增加对分离效果的帮助就比较不明显
还有，用加压泵，有可能把填料 ...

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13楼2010-02-11 22:58:06
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liujiahui

木虫 (著名写手)
最后，来总结一下这个帖子吧：

主要根据“对水过敏”的介绍，和我自己的实验现象。G50流的比G100的快。 （对水过敏真的是个很有意思的名字，每次见到都会笑一笑，然后觉得很悲伤……）

没有解决的问题有：1. 为什么颗粒小，反而水流的快呢？G100应该孔径更大才对呀，为什么反而流的更慢呢？

2. 我的样品没有得到让老板满意的分离效果。其实我到最后也不敢确定，我分得另一个组分的分子量究竟是多少。虽然我觉得应该用G25试一试，但是老板建议用G200试一试。结果到网上一查，G200由于使用的时候压力过大，容易塌，基本被superdex-200取代。所以，下一步，我要研究一下这个superdex-200究竟怎么用。准备遇到问题改在“生物科学”版面上求助提问。因为superdex-200主要用来分多糖和蛋白质。
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14楼2010-02-12 07:37:37
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对水过敏

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
karl2100(金币+1):多谢指教！ 2010-02-12 20:24
引用回帖:
Originally posted by liujiahui at 2010-02-11 22:58:06:
多谢，

上一个帖子的基本都能看懂，但这个帖子里的内容就不是很明白：

1. 为什么说：“用到G25了都，这个时候长度的增加对分离效果的帮助就比较不明显” 呢？首先，为什么用的G25，长度就不明显，是说如果用 ...

1.用到G25的意思是，目标和杂质分子量都比较小了，这时候分离效果本身不够好，不像那些上万的分子，和杂质相比MW相差巨大，这时候就算柱子装的长，目标和杂质都不一定分的很开
2.这个我也不清楚，我觉得，这个孔径不是我们想的那种状态，分子筛了都，这和我们想的那种沙子一样的状态就有区别了，不是颗粒小，而是单独的填料粒子里头的孔径小，不知道这么解释对不对。目标是从填料间空隙走的，压缩的话，填料会变形，这个填料变形应该是正确的理论，HPLC上压力无法太高，就是填料机械强度不够造成的，过高的压力，就把填料间空隙全堵死了，不然，提高压力能提高分离效果的。过长的高度可能也会造成填料自己把自己压死了哈，我猜= =
3.superdex是不是就是S系列的填料呢？我也不清楚哈~包装盒在实验室放着呢，我做的就是多糖，不过偏向结构方向，所以我也不清楚生化那边做的多糖是什么样子
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鄙视我的人多了去了，你算老几啊！！！
15楼2010-02-12 17:25:42
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liujiahui

木虫 (著名写手)
多谢！

我也不知道是不是S系列的。去网上查了一下，结果翻到了一个手册http://www.ebiotrade.com/GE/AKTAclub7/1.PDFs/18102218AI.pdf
虽然，挺详细的，但是好长啊，不知有没有我想要的内容。
引用回帖:
Originally posted by 对水过敏 at 2010-02-12 17:25:42:

1.用到G25的意思是，目标和杂质分子量都比较小了，这时候分离效果本身不够好，不像那些上万的分子，和杂质相比MW相差巨大，这时候就算柱子装的长，目标和杂质都不一定分的很开
2.这个我也不清楚，我觉得，这个 ...

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16楼2010-02-12 23:00:57
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