[交流] 【求助/交流】质粒测序，公司说质量不好是怎么回事？

Originally posted by 雨中蜗牛 at 2010-02-02 19:00:28:
是不是你质粒的信号低，你送的菌液是不是新鲜的啊？
有的公司测得也不准，有一次我在上海生工测得不行又改英骏测得，英俊的结果还行
不过我们这大部分在华大测，挺准的！

Originally posted by yang0071 at 2010-02-02 19:18:22:
目的片段gc含量高不？
高的话，要特别跟公司说明，他们会适当调整测序buffer的

Originally posted by jasco at 2010-02-03 13:04:21:
因为你做的3‘race，所以应该目的片段的3’端中含有polyA，如果你从polyA这头测，就会是一串T，会影响测序结果的，建议你从目的片段5‘端单向测，并且walking测到出现polyA序列或者告知测序公司可能会有polyA的影 ...

Originally posted by yujiaping1 at 2010-02-03 14:00:52:

但是我这个是双向测的，公司说另一边根本就没法测
再说我是做了TA克隆的，polyA不是在中间嘛，应该没有影响了

Originally posted by jasco at 2010-02-03 14:14:15:


肯定能测的，就是需要调整反应，

测序时候如果连续十几个T就会导致信号异常的，我测cDNA文库和race时候也遇到过类似问题，5‘端测正常的，3’端测就不行，但是测序公司调整反应后就测出来了

Originally posted by yujiaping1 at 2010-02-03 14:46:12:

韩国这边的公司测的结果都怪怪的，他们现在就说是我的样品有问题，我确信肯定质粒是没有问题的，用试剂盒回收的，酶切检测，亮度很好
而且他们测序的可信判读也很短，也就四五百，我都快被气死了