Originally posted by l3labc at 2010-02-02 15:16:48:
如题，将我的目的片段构建到pTMBV4上，只有xbaI这一个酶切位点可以用。尝试了很多发生，有些问题不明白，想请教一下：
1：提起重组质粒做酶切后，为什么切下的条带大小不一致。
2：测序正确了两次，但我的目的片 ...

Originally posted by l3labc at 2010-02-02 18:57:00:



我也没有少挑菌。关键是菌落PCR是阳性的，而酶切却没有条带！

Originally posted by yang0071 at 2010-02-02 19:15:55:


没有条带是连载体条带也没有，还是说没有目的片段？
如果连载体条带也没有，说明你的质粒拷贝数太低

Originally posted by 断弦的琴 at 2010-02-02 16:21:41:
菌落PCR时的引物采用

P1： 目的基因上游的载体通用引物
p2： 目的基因的反向引物。

能扩增出来的去测序。

Originally posted by hpp509 at 2010-02-02 15:40:27:
你说的“提起重组质粒做酶切后，为什么切下的条带大小不一致”，条带间有多大差异？
我觉得不是反向的比较容易，这种连接应该是随机的，只是可能你选择的恰好是反向的。
我觉得目前只有两个办法：第一个，你多挑 ...