24小时热门版块排行榜

当前主题已经存档。

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】长片段基因在酵母中表达如何选择载体？

长6.8K左右的基因在酵母中表达应选择哪种酵母表达载体比较合适？我的基因要分泌表达，它在酵母表达菌株中有背景表达，所以载体上必须带有纯化标签。另外，请教各位高手，我是用染色体步移法一段一段把基因扩出来的，已完成测序，现在要一次性把6.8K的片段扩增出来，该如何做？困惑中，期待大家的建议……

1楼 2010-01-30 17:52:28

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

木虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

看楼主的意思要有纯化标签，应该是想分泌表达出来纯化，但真的太大了，即使用毕赤

pcr出6.8kb的片段倒不难，现在很多公司有扩长片段的高保真酶，优化好pcr条件，应该没有问题。实在不行就分两段扩出来再拼接

3楼2010-02-02 09:30:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

木虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

从cDNA一次拿到6.8k可能性很小，建议分段进行（不管是从dna还是cDNA开始做）

6楼2010-02-02 10:44:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

木虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

对的，用重叠pcr做拼接，注意去掉内含子序列，
不要称呼我老师啦，探讨中互相学习
原核表达肯定不行，酵母也危险
细胞表达能做出10kb以上基因的表达，但是表达量都很低，纯化难度很大。

一个建议：能否针对你这个基因某些表位做表达，而不是做全长基因表达？这个要看你研究的目的了

8楼2010-02-02 14:09:01

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 xiaofang9826 的主题更新