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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题
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heqin-1985

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题 已有12人参与

我今天用考马斯亮蓝法测定蛋白含量时发现我的蛋白和考马斯亮蓝试剂作用后的蓝色物质在测吸光时不同时间时测得的值不同，而且一直在降低，请问这是怎么回事啊？现象正常吗？还有pH的差异会影响考马斯亮蓝法测定的结果吗？请教大家~~谢谢~~
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1楼 2010-01-26 13:51:51
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catherine_

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 植物教主 at 2010-10-14 20:47:18:



那如果我想知道pH对某浸出液的蛋白含量的影响，我用酸碱调了从2-12的6个pH值，是否我的空白也要用水代替浸出液，然后调到对应的pH呢?

我觉得还是配两种空白比较好，一种就是蒸馏水，一种就是蒸馏水和那种浸出液的混合液体。
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11楼2010-10-15 08:52:48
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catherine_

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你观察到的结果是正确的，确实一直在降低。
pH的影响是巨大的，不过你肯定要做空白对照的呀，那背景不就消除了吗？
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2楼2010-01-26 15:48:31
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zmchail

金虫 (小有名气)

答复

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PH在正常范围内是不影响考染的，只有强的还原物质如DDT  CHAPS 等影响，一般染色剂与蛋白质在5分钟内达到稳定！参考1976年的一篇英文文献吧！
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3楼2010-01-27 12:19:09
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qrf0704

铁虫 (小有名气)
等稳定5分钟后再测定
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4楼2010-01-27 12:55:09
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