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elliott2591

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】3‘RACE adapter sequence

求助3’RACE 接头序列
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2): 1-25 19:36
接头序列在试剂盒说明里应该有吧。marathon的是:
5‘-CTAATACGACTCACTATAGGGCTCGAGCGGCCGCCCGGGCAGGT-3'
3楼2010-01-25 19:25:24
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2): 1-25 19:36
elliott2591(金币+1): 2010-01-29 17:35
你想求助什么, 你什么地方不明白,3‘RACE产物最好是克隆测序效果好,我上次胶回收后直接测序,九个样,序列对了7个,但是只有一个测到poly(A),据说是poly(A)和胶回收对测序都有影响,所以现在又克隆送质粒了,这样测得效果可以保证
2楼2010-01-25 16:57:30
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

哦,我才看明白。
我用的clontech的盒子
3‘RACE cDNA合成的引物是:
5'–AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC(T)30V N–3'
之后用的是Universal primer A mix:
Long (0.4 µM):
5'–CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT–3'
Short (2 µM):
5'–CTAATACGACTCACTATAGGGC–3'
4楼2010-01-25 19:58:28
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elliott2591

金虫 (小有名气)

回复2楼

你说poly(A)对测序有影响是什么意思?
我3‘RACE做了一个月了,有时候能够扩出条带来,但是测序总是没有poly(A)结构,我按照分子克隆上设计的接头引物,结果也没有发现接头引物!所以想换个接头引物!
5楼2010-01-26 12:48:30
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