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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】弱问一下农杆菌转化操作的一些细节问题
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jcjcj

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】弱问一下农杆菌转化操作的一些细节问题

新手，实验室也没有人做过，所以上来请教
请问dmso配利福平的时候需要过滤除菌吗
加了利福平抗性的平板或者试管是要避光的吗？避光的要求严格吗？
我的gv3101感受态是利福平和卡那抗性的，想转化的质粒也是卡那抗性的，这样转化合适吗？阳性克隆的确定是不是只能用pcr检测？但是我担心即使有阳性克隆，在传代的过程中转化的质粒会不会丢失呢？加两倍的卡那能解决问题吗？
谢谢了
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1楼 2010-01-22 21:57:17
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jcjcj

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biogefart at 2010-1-23 08:21:
楼上说的有理，最好滤一下抗生素，另外菌株和质粒都是kan抗性的话，质粒的抗性筛选功能就失去了，到时候长的满满板的估计得挑一个月克隆做PCR鉴定。

其实我更担心的是即使挑到了也会因为没有抗性的压力丢失质粒
有没有什么好的办法呢？质粒不是自己构建的，而且也没有条件改变
赞一下 回复此楼
7楼2010-01-23 13:21:13
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pengl001

木虫 (小有名气)
★ ★
jcjcj(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 1-23 12:30
its better to use filter before you add 利福平
赞一下(12人) 回复此楼
Yes,Ican!
2楼2010-01-23 04:26:03
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biogefart

木虫 (著名写手)
★ ★
jcjcj(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 1-23 12:31
楼上说的有理，最好滤一下抗生素，另外菌株和质粒都是kan抗性的话，质粒的抗性筛选功能就失去了，到时候长的满满板的估计得挑一个月克隆做PCR鉴定。
赞一下(11人) 回复此楼
闹太套
3楼2010-01-23 08:21:06
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
jcjcj(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+2): 1-23 12:31
我们实验室有人做，刚咨询了一下，他们一直用75%乙醇配利福平，不过滤除菌。配75乙醇的超纯水灭菌，在超净台配制。没有问题。
卡纳也用超纯水配制，也没有过滤。同样是在超净台中配。
赞一下(11人) 回复此楼
4楼2010-01-23 10:10:51
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