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monkey514

至尊木虫 (知名作家)

多重人格的虫子

[交流] 【求助】茚三酮检测方法 已有2人参与

各位高手,我现在有一批多糖样品需要测定其中的蛋白质,只是想用茚三酮方法定性一下哪几个样品里面有蛋白质(定性检测一下即可),我现在想请教一下茚三酮试剂的配置方法以及反应时的条件(反应温度、时间等),样品用量,如果其中还需要加入缓冲液的话还希望高手能提供缓冲液的配制方法,如果出现阳性反应的话会是什么现象
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wumingyu

铜虫 (小有名气)

★ ★
monkey514(金币+1):谢谢参与
zeng1986kai(金币+1):谢谢应助! 2010-05-18 20:31:56
配制方法:1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸
茚三酮不是太好溶解,需要多搅拌才行。
加醋酸只是给显色提供一个微酸性的环境。
配置好的茚三酮显色剂装在棕色瓶中避光保存,是可以多次使用的。

点板,在反应液中浸泡几秒钟,然后高温烘烤几分钟,显示黄或红色。
5楼2010-01-22 17:23:11
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cherbim

银虫 (小有名气)

★ ★
monkey514(金币+1):谢谢参与
zeng1986kai(金币+1):谢谢应助! 2010-05-18 20:31:38
此反应的适宜pH为5~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同,酸度过大时甚至不显色。
2楼2010-01-22 14:48:01
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bewin29

木虫 (正式写手)

水镜小生

★ ★
monkey514(金币+1):谢谢参与
zeng1986kai(金币+1):谢谢应助! 2010-05-18 20:31:42
阳性反应的话就是有显色反应,深浅不一;无色便是阴性
木虫吃的不是木头,是寂寞!
3楼2010-01-22 14:58:26
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cherbim

银虫 (小有名气)

★ ★
zeng1986kai(金币+2):谢谢应助! 2010-05-18 20:31:51
水和茚三酮的配制
组        成        搅拌时间,min        溶液1        溶液2
1.蒸馏水,mL
2.乙酸钠(NaOAc),g
3.冰乙酸(CH3COOH),mL
4.缓冲液总体积,mL
5.pH
6.乙二醛甲醚,mL
7.茚三酮,g
8.TiCl2溶液,mL
9.总体积,mL       




20*
15
10        150
82
25
250
5.5
750
20
1.7
1000        600
328
100
1000
5.5
3000
80
6.8
4000
*为通N2搅拌时间。

[ Last edited by cherbim on 2010-1-22 at 15:01 ]
4楼2010-01-22 15:00:18
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