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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR电泳图求助!

预计目的片段大小应该在850,电泳,如图,新手大家帮我看下,有些不懂!
第二道是MARKER DL2000
第三道是PCR产物

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2010-1-21 at 21:06 ]
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默默的等待

金虫 (正式写手)

兄弟 你想问什么啊  不明白 具体点
2楼2010-01-21 20:39:02
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cavafory

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
jiangkuo0520(金币+2,VIP+0):谢谢!阴性对照怎么做啊? 能具体点说吗? 1-21 21:05
amisking(金币+3,VIP+0): 1-21 21:05
“在已有片段上2次延伸,共延伸了66BP”什么意思,你的目的片段只有66个碱基?做了两个循环?如果只有两个循环,那你的结果就好奇怪

但是你的图看起来很漂亮啊,看起来是你有个约750bp的目的带,下面的大概是引物二聚体,你的引物可以减少点量,上面的带是你的模板加多了

另外做PCR时记得做阴性对照,有时候有假阳性
3楼2010-01-21 20:52:48
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沙中清泉

木虫 (正式写手)

这图怎么拍的
4楼2010-01-21 21:14:50
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cavafory

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
阴性对照是为了看你的体系对不对,有没有污染的情况存在,你可以将你的体系内的任何一种东西用无菌水代替,但是一般是以不加含有目的带的模板作为阴性对照
5楼2010-01-21 21:16:46
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 沙中清泉 at 2010-1-21 21:14:
这图怎么拍的

科里的凝胶成像仪不大好用,在紫外灯下看效果比这能好一些,拍完图,我用QQ截图弄成这个大小,传上来了!
6楼2010-01-21 21:22:54
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by cavafory at 2010-1-21 20:52:
“在已有片段上2次延伸,共延伸了66BP”什么意思,你的目的片段只有66个碱基?做了两个循环?如果只有两个循环,那你的结果就好奇怪

但是你的图看起来很漂亮啊,看起来是你有个约750bp的目的带,下面的大概是引 ...

模板是我的PCR产物,会产生上面那条带吗?
7楼2010-01-21 21:24:36
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amilie030312

金虫 (正式写手)

是二次PCR结果吧。第一你的一次PCR产物稀释的不够,导致二次PCR模版太浓了;第二下面是引物二聚体,说明你引物设计的不是很好,但不影响实验结果;第三目的片段在750bp,也有可能是你的目的片段,因为DL2000的Marker在750-1000的区域距离太近了,看的都不是很明显;第四,2000以上还有片段,说明引物不特异,还能够扩增出其他片段出来,但片段那么大也不会影响你结果。以上所有说的不影响结果是针对你不是做定量,只做普通PCR才会不影响,否则引物二聚体和非特异扩增都会影响染料法定量的结果。
8楼2010-01-22 14:48:07
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-1-22 14:48:
是二次PCR结果吧。第一你的一次PCR产物稀释的不够,导致二次PCR模版太浓了;第二下面是引物二聚体,说明你引物设计的不是很好,但不影响实验结果;第三目的片段在750bp,也有可能是你的目的片段,因为DL2000的Mar ...

精辟!!
9楼2010-01-22 19:17:22
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