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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR电泳图求助！
汕头大学海洋科学接受调剂
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR电泳图求助！

预计目的片段大小应该在850，电泳，如图，新手大家帮我看下，有些不懂！
第二道是MARKER DL2000
第三道是PCR产物

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2010-1-21 at 21:06 ]
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1楼 2010-01-21 20:29:31
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默默的等待

金虫 (正式写手)
兄弟 你想问什么啊  不明白 具体点
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2楼2010-01-21 20:39:02
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cavafory

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
jiangkuo0520(金币+2,VIP+0):谢谢！阴性对照怎么做啊？ 能具体点说吗？ 1-21 21:05
amisking(金币+3,VIP+0): 1-21 21:05
“在已有片段上2次延伸，共延伸了66BP”什么意思，你的目的片段只有66个碱基？做了两个循环？如果只有两个循环，那你的结果就好奇怪

但是你的图看起来很漂亮啊，看起来是你有个约750bp的目的带，下面的大概是引物二聚体，你的引物可以减少点量，上面的带是你的模板加多了

另外做PCR时记得做阴性对照，有时候有假阳性
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3楼2010-01-21 20:52:48
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
这图怎么拍的
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4楼2010-01-21 21:14:50
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cavafory

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
阴性对照是为了看你的体系对不对，有没有污染的情况存在，你可以将你的体系内的任何一种东西用无菌水代替，但是一般是以不加含有目的带的模板作为阴性对照
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5楼2010-01-21 21:16:46
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 沙中清泉 at 2010-1-21 21:14:
这图怎么拍的

科里的凝胶成像仪不大好用，在紫外灯下看效果比这能好一些，拍完图，我用QQ截图弄成这个大小，传上来了！
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6楼2010-01-21 21:22:54
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by cavafory at 2010-1-21 20:52:
“在已有片段上2次延伸，共延伸了66BP”什么意思，你的目的片段只有66个碱基？做了两个循环？如果只有两个循环，那你的结果就好奇怪

但是你的图看起来很漂亮啊，看起来是你有个约750bp的目的带，下面的大概是引 ...

模板是我的PCR产物，会产生上面那条带吗？
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7楼2010-01-21 21:24:36
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amilie030312

金虫 (正式写手)
是二次PCR结果吧。第一你的一次PCR产物稀释的不够，导致二次PCR模版太浓了；第二下面是引物二聚体，说明你引物设计的不是很好，但不影响实验结果；第三目的片段在750bp，也有可能是你的目的片段，因为DL2000的Marker在750-1000的区域距离太近了，看的都不是很明显；第四，2000以上还有片段，说明引物不特异，还能够扩增出其他片段出来，但片段那么大也不会影响你结果。以上所有说的不影响结果是针对你不是做定量，只做普通PCR才会不影响，否则引物二聚体和非特异扩增都会影响染料法定量的结果。
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8楼2010-01-22 14:48:07
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-1-22 14:48:
是二次PCR结果吧。第一你的一次PCR产物稀释的不够，导致二次PCR模版太浓了；第二下面是引物二聚体，说明你引物设计的不是很好，但不影响实验结果；第三目的片段在750bp，也有可能是你的目的片段，因为DL2000的Mar ...

精辟！！
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9楼2010-01-22 19:17:22
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