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cui00008

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】植物rna提取问题,天根的试剂盒,帮忙分析一下 已有3人参与

提取月季幼嫩叶片的RNA,材料是3周前菜的,液氮处理后,-80保存,用天根的植物提取试剂盒,全部在超净台操作,药品DEPC水配置,器皿160°烘烤3小时,枪头用0.5M的NaOH浸泡10min,无菌水清洗,高压灭菌两次,烘干,电泳仪用酒精擦洗。做了几次,结果都不好。帮忙分析一下
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-19 18:06
植物rna提取确实比较难,主要多糖多酚物质太多,有些用takara或者invitrogen植物提取试剂就行,有些还是得用ctab法提取。

你电泳前两个rna降解了,后4个杂质太多。建议你将每份材料用量减少一半再试试看,
2楼2010-01-19 14:12:44
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

后四个可能可以用,但前两个肯定是降解了
3楼2010-01-19 19:18:11
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wwyy0818

新虫 (小有名气)

枪头要用DEPC泡,大哥...............
另外,你的RNA全部降解
4楼2010-01-20 08:46:33
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割麦者

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也用天根的试剂盒提取植物的RNA,
效果真的不错
楼主的结果肯定是RNA降解太厉害了。
楼上说的对,枪头也应该用DEPC水泡过夜。离心管也应该处理。
不知道楼主做实验是否有常换手套的习惯?这个习惯在提取RNA实验中可是必须的……
还有植物组织研磨过程是否保持液氮没有完全挥发?
5楼2010-01-20 09:17:17
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们也是用天根的提的  可效果确实不错哆  我觉得这磨样的什么很关键,要快还要磨得细,不要让其潮解。还有不知道你的样品处理会不有问题,最好是采新鲜的样品。还有注意下操作,常换手套,还要载口罩。其它的我觉得问题就不大了。
6楼2010-01-20 10:01:35
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cui00008

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-19 19:18:
后四个可能可以用,但前两个肯定是降解了

恩,谢谢,试剂盒里的离心管什么的,还要消毒吗?
7楼2010-01-21 14:35:41
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cui00008

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by tuodecai at 2010-1-20 10:01:
我们也是用天根的提的  可效果确实不错哆  我觉得这磨样的什么很关键,要快还要磨得细,不要让其潮解。还有不知道你的样品处理会不有问题,最好是采新鲜的样品。还有注意下操作,常换手套,还要载口罩。其它的我觉 ...

带着液氮的时候磨不细啊,就是在最后挥发完的时候才能磨细,样品采后,在液氮内速冻几分钟,才能放-80冰箱?试剂盒里带的离心管什么还要消毒吗?
8楼2010-01-21 14:39:31
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cui00008

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 割麦者 at 2010-1-20 09:17:
我也用天根的试剂盒提取植物的RNA,
效果真的不错
楼主的结果肯定是RNA降解太厉害了。
楼上说的对,枪头也应该用DEPC水泡过夜。离心管也应该处理。
不知道楼主做实验是否有常换手套的习惯?这个习惯在提取RNA实 ...

你们怎么加液氮到研钵的,我要自己用液氮罐倒,不太方便。样品采后要速冻几分钟,才能放冰箱?试剂盒里带的离心管,过滤头什么的,要灭菌吗?
9楼2010-01-21 14:43:17
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zzw1221

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没个舀子什么的吗,枪头DEPC水处理,手套口罩!
呵呵,沉淀的时间可以稍微长点。看能不能好点!
10楼2010-01-21 14:59:46
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