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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】植物rna提取问题，天根的试剂盒，帮忙分析一下
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cui00008

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】植物rna提取问题，天根的试剂盒，帮忙分析一下 已有3人参与

提取月季幼嫩叶片的RNA，材料是3周前菜的，液氮处理后，-80保存，用天根的植物提取试剂盒，全部在超净台操作，药品DEPC水配置，器皿160°烘烤3小时，枪头用0.5M的NaOH浸泡10min，无菌水清洗，高压灭菌两次，烘干，电泳仪用酒精擦洗。做了几次，结果都不好。帮忙分析一下
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1楼 2010-01-19 11:14:13
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-19 18:06
植物rna提取确实比较难，主要多糖多酚物质太多，有些用takara或者invitrogen植物提取试剂就行，有些还是得用ctab法提取。

你电泳前两个rna降解了，后4个杂质太多。建议你将每份材料用量减少一半再试试看，
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2楼2010-01-19 14:12:44
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
后四个可能可以用，但前两个肯定是降解了
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3楼2010-01-19 19:18:11
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wwyy0818

新虫 (小有名气)
枪头要用DEPC泡，大哥...............
另外，你的RNA全部降解
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4楼2010-01-20 08:46:33
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割麦者

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也用天根的试剂盒提取植物的RNA,
效果真的不错
楼主的结果肯定是RNA降解太厉害了。
楼上说的对，枪头也应该用DEPC水泡过夜。离心管也应该处理。
不知道楼主做实验是否有常换手套的习惯?这个习惯在提取RNA实验中可是必须的……
还有植物组织研磨过程是否保持液氮没有完全挥发？
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5楼2010-01-20 09:17:17
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们也是用天根的提的  可效果确实不错哆  我觉得这磨样的什么很关键，要快还要磨得细，不要让其潮解。还有不知道你的样品处理会不有问题，最好是采新鲜的样品。还有注意下操作，常换手套，还要载口罩。其它的我觉得问题就不大了。
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6楼2010-01-20 10:01:35
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cui00008

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-19 19:18:
后四个可能可以用，但前两个肯定是降解了

恩，谢谢，试剂盒里的离心管什么的，还要消毒吗？
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7楼2010-01-21 14:35:41
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cui00008

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by tuodecai at 2010-1-20 10:01:
我们也是用天根的提的  可效果确实不错哆  我觉得这磨样的什么很关键，要快还要磨得细，不要让其潮解。还有不知道你的样品处理会不有问题，最好是采新鲜的样品。还有注意下操作，常换手套，还要载口罩。其它的我觉 ...

带着液氮的时候磨不细啊，就是在最后挥发完的时候才能磨细，样品采后，在液氮内速冻几分钟，才能放-80冰箱？试剂盒里带的离心管什么还要消毒吗？
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8楼2010-01-21 14:39:31
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cui00008

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 割麦者 at 2010-1-20 09:17:
我也用天根的试剂盒提取植物的RNA,
效果真的不错
楼主的结果肯定是RNA降解太厉害了。
楼上说的对，枪头也应该用DEPC水泡过夜。离心管也应该处理。
不知道楼主做实验是否有常换手套的习惯?这个习惯在提取RNA实 ...

你们怎么加液氮到研钵的，我要自己用液氮罐倒，不太方便。样品采后要速冻几分钟，才能放冰箱？试剂盒里带的离心管，过滤头什么的，要灭菌吗？
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9楼2010-01-21 14:43:17
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zzw1221

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没个舀子什么的吗，枪头DEPC水处理，手套口罩！
呵呵，沉淀的时间可以稍微长点。看能不能好点！
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10楼2010-01-21 14:59:46
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