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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教关于PCRmg离子的问题
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axiaoru

[交流] 【求助/交流】请教关于PCRmg离子的问题

请问有没有用过Takara公司的PCR试剂盒的，那个PCRbufer后面没写加没加镁离子，用不用再加入？加的话浓度应该是多少？谢谢！
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1楼 2010-01-17 14:39:56
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axiaoru

请问大家周末一般都干啥？
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2楼2010-01-17 15:18:35
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水滴娃娃

铁虫 (初入文坛)
★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-17 16:10
你先扩扩看，扩不出来或效果不好的话，可以另加Mg离子，加时做个梯度对照，看哪个浓度好。
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3楼2010-01-17 15:33:08
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
1949stone(金币+1,VIP+0):也有不加的 1-17 16:11
一般buffer 里面都是加了mg2+的。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2010-01-17 16:04:08
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
★
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我用过，它上面没写Mg2+ free的，就不用加了，因为它里面已经包含了
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5楼2010-01-17 16:14:58
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Takara的Taq酶，分为Buffer含镁离子的，和buffer、镁离子分开的两种型号，买的时候可以从目录上清楚的查到，buffer中不含镁离子的会写有Mg2+-free标记，如果你的buffer没有该字样，那么通常的扩增都不需要添加镁离子
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6楼2010-01-17 21:30:50
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axiaoru

多谢了，我那上面没写，但是我没加扩不出来，就算有也是弥散状；还有一次加了点还是弥散状。总之我扩了一个多月了都那样。
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7楼2010-01-18 07:54:57
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by axiaoru at 2010-1-18 07:54:
多谢了，我那上面没写，但是我没加扩不出来，就算有也是弥散状；还有一次加了点还是弥散状。总之我扩了一个多月了都那样。

弥散带出现了，说明酶已经起作用了，只是没有扩增出特异性条带而已，估计是其他原因，最大的可能还是引物问题，考虑引物退火温度和重新设计引物
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8楼2010-01-18 16:14:59
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axiaoru

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-18 16:14:

弥散带出现了，说明酶已经起作用了，只是没有扩增出特异性条带而已，估计是其他原因，最大的可能还是引物问题，考虑引物退火温度和重新设计引物

可是上周重新合成的内标引物扩出来还是弥散啊！
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9楼2010-01-19 08:17:50
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yxx41

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没写就是加了，没加会标注Mg Free的
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内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
10楼2010-01-19 08:45:15
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