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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNase 1酶切DNA形成片段体系和方法
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姜大磊

木虫 (小有名气)

求教

谁能帮帮我啊。。怎么才能使用DNase1 酶切出DNA片段来啊。。
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11楼2010-01-21 09:35:06
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
。。。。。。无语了，你是在做DNA shuffling 么？

这个我做过的，我也是用的Takara的 DNase I ，我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个：

16度酶切，200ul体系，其中含有8ul稀释100被后的酶。反应时间结束后，加入10mM

终浓度的EDTA，95度失活（这个不会有影响的，拿出来室温放置时会自动复性

的）。然后跑胶2%。切胶回收。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
12楼2010-01-21 12:27:15
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
。。。。。。无语了，你是在做DNA shuffling 么？

这个我做过的，我也是用的Takara的 DNase I ，我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个：

16度酶切，200ul体系，其中含有8ul稀释100被后的酶。PCR产物的量要足，至少要

5ug。反应时间结束后，加入10mM终浓度的EDTA，95度失活（这个不会有影响的，

拿出来室温放置时会自动复性的）。然后跑胶2%。切胶回收。

你可以下篇文献看看，最早做DNA shuffling 的发表在nature上面的文献。WP

Stemmer 的作者，1994年的。DNA shuffling by random fragmentation and

reassembly
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
13楼2010-01-21 12:30:44
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姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-1-21 12:30:
。。。。。。无语了，你是在做DNA shuffling 么？

这个我做过的，我也是用的Takara的 DNase I ，我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个：

16度酶切，200ul体系，其中含有8ul稀释100被后的 ...

奥。你用的Takara的DNase I 的哪一种啊？有两种：一种代码是D2210 一种是D2215的。我用的是后一种。我做的就是DNA shuffling。
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14楼2010-01-21 16:23:54
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姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 姜大磊 at 2010-1-21 16:23:

奥。你用的Takara的DNase I 的哪一种啊？有两种：一种代码是D2210 一种是D2215的。我用的是后一种。我做的就是DNA shuffling。

我刚刚在nature 上查过了。。没找到你所说的文章啊。大哥，能不能加个QQ 指导我一下啊。。 我的Q 446394234  谢谢啦。
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15楼2010-01-21 17:53:58
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姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-1-21 12:30:
。。。。。。无语了，你是在做DNA shuffling 么？

这个我做过的，我也是用的Takara的 DNase I ，我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个：

16度酶切，200ul体系，其中含有8ul稀释100被后的 ...

我刚刚在nature 上查过了。。没找到你所说的文章啊。大哥，你那边有的话传给我行吗？邮箱jiangdalei121121@163.com  或者能不能加个QQ 指导我一下啊。我的Q 446394234  谢谢啦 我是研一的。现在酶切不出小片段来，课题进行不下去了，麻烦大哥了，谢谢。
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16楼2010-01-23 13:54:25
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姜大磊

木虫 (小有名气)

求教

引用回帖:
Originally posted by 沙中清泉 at 2010-01-16 14:50:43:
那个酶太厉害了

哥们，你用过DNase I 做实验吗？能不能告诉我你是怎么设置的体系和方法啊
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17楼2010-01-25 10:28:34
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姜大磊

木虫 (小有名气)

求助

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-01-21 12:30:44:
。。。。。。无语了，你是在做DNA shuffling 么？

这个我做过的，我也是用的Takara的 DNase I ，我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个：

16度酶切，200ul体系，其中含有8ul稀释100被后的 ...

大哥 我酶切出小片段来了，谢谢你啊！ 可是火箭尾巴的这些小片段怎么回收的啊？请大哥再次指教一下。谢谢
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18楼2010-02-28 08:56:52
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