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姜大磊

木虫 (小有名气)

求教

谁能帮帮我啊。。怎么才能使用DNase1 酶切出DNA片段来啊。。
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11楼2010-01-21 09:35:06
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
。。。。。。无语了,你是在做DNA shuffling 么?

这个我做过的,我也是用的Takara的 DNase I ,我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个:

16度酶切,200ul体系,其中含有8ul稀释100被后的酶。反应时间结束后,加入10mM

终浓度的EDTA,95度失活(这个不会有影响的,拿出来室温放置时会自动复性

的)。然后跑胶2%。切胶回收。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
12楼2010-01-21 12:27:15
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

。。。。。。无语了,你是在做DNA shuffling 么?

这个我做过的,我也是用的Takara的 DNase I ,我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个:

16度酶切,200ul体系,其中含有8ul稀释100被后的酶。PCR产物的量要足,至少要

5ug。反应时间结束后,加入10mM终浓度的EDTA,95度失活(这个不会有影响的,

拿出来室温放置时会自动复性的)。然后跑胶2%。切胶回收。

你可以下篇文献看看,最早做DNA shuffling 的发表在nature上面的文献。WP

Stemmer 的作者,1994年的。DNA shuffling by random fragmentation and

reassembly
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13楼2010-01-21 12:30:44
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姜大磊

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-1-21 12:30:
。。。。。。无语了,你是在做DNA shuffling 么?

这个我做过的,我也是用的Takara的 DNase I ,我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个:

16度酶切,200ul体系,其中含有8ul稀释100被后的 ...

奥。你用的Takara的DNase I 的哪一种啊?有两种:一种代码是D2210 一种是D2215的。我用的是后一种。我做的就是DNA shuffling。
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14楼2010-01-21 16:23:54
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姜大磊

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 姜大磊 at 2010-1-21 16:23:

奥。你用的Takara的DNase I 的哪一种啊?有两种:一种代码是D2210 一种是D2215的。我用的是后一种。我做的就是DNA shuffling。

我刚刚在nature 上查过了。。没找到你所说的文章啊。大哥,能不能加个QQ 指导我一下啊。。 我的Q 446394234  谢谢啦。
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15楼2010-01-21 17:53:58
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姜大磊

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-1-21 12:30:
。。。。。。无语了,你是在做DNA shuffling 么?

这个我做过的,我也是用的Takara的 DNase I ,我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个:

16度酶切,200ul体系,其中含有8ul稀释100被后的 ...

我刚刚在nature 上查过了。。没找到你所说的文章啊。大哥,你那边有的话传给我行吗?邮箱jiangdalei121121@163.com  或者能不能加个QQ 指导我一下啊。我的Q 446394234  谢谢啦 我是研一的。现在酶切不出小片段来,课题进行不下去了,麻烦大哥了,谢谢。
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16楼2010-01-23 13:54:25
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姜大磊

木虫 (小有名气)

求教

引用回帖:
Originally posted by 沙中清泉 at 2010-01-16 14:50:43:
那个酶太厉害了

哥们,你用过DNase I 做实验吗?能不能告诉我你是怎么设置的体系和方法啊
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17楼2010-01-25 10:28:34
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姜大磊

木虫 (小有名气)

求助

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-01-21 12:30:44:
。。。。。。无语了,你是在做DNA shuffling 么?

这个我做过的,我也是用的Takara的 DNase I ,我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个:

16度酶切,200ul体系,其中含有8ul稀释100被后的 ...

大哥 我酶切出小片段来了,谢谢你啊! 可是火箭尾巴的这些小片段怎么回收的啊?请大哥再次指教一下。谢谢
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18楼2010-02-28 08:56:52
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