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姜大磊

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNase 1酶切DNA形成片段体系和方法

我做的是回收DNA酶切小片段,用的是DNase酶切,但是几次下来跑电泳都没有出来小片段,一点条带都没有,酶切体系是(模版,buffer(带有镁离子),DNase 1  DD水)
请高手指教,感激万分
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姜大磊

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-1-21 12:30:
。。。。。。无语了,你是在做DNA shuffling 么?

这个我做过的,我也是用的Takara的 DNase I ,我的PCR产物是1194bp。

用的体系就是我给你描述的那个:

16度酶切,200ul体系,其中含有8ul稀释100被后的 ...

我刚刚在nature 上查过了。。没找到你所说的文章啊。大哥,你那边有的话传给我行吗?邮箱jiangdalei121121@163.com  或者能不能加个QQ 指导我一下啊。我的Q 446394234  谢谢啦 我是研一的。现在酶切不出小片段来,课题进行不下去了,麻烦大哥了,谢谢。
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16楼2010-01-23 13:54:25
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

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1949stone(金币+2,VIP+0): 1-16 12:34
DNase酶很强的,要摸索一下酶的用量。还有酶切时间。切的时间长了就全切成十几bp大小了。跑电泳的时候要用高浓度的胶,否则时间稍微一长就全跑出去了。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-01-16 10:57:43
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姜大磊

木虫 (小有名气)

请指教

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-1-16 10:57:
DNase酶很强的,要摸索一下酶的用量。还有酶切时间。切的时间长了就全切成十几bp大小了。跑电泳的时候要用高浓度的胶,否则时间稍微一长就全跑出去了。

大哥你做过这个酶的酶切吗???能不能说一下你的酶切体系和时间把握以及电泳啊。。十分感谢、
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4楼2010-01-17 21:23:53
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brightfuture01

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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-17 23:50
酶切体系用100-200ul的,Takara的酶,取1ul,稀释100倍,然后在200ul体系中加8ul稀释物。酶切10ug左右的DNA,时间你要自己摸索下,5min取个梯度,取到20min。

好运。
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5楼2010-01-17 22:53:15
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